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免疫细胞化学染色在骨髓涂片诊断中应用 　　【摘 要】 目的：分析免疫细胞化学染色在骨髓涂片诊断中的应用价值。方法：在骨髓涂片上直接进行免疫细胞化学标记进行明确诊断。结果：结合免疫细胞化学，可达到准确鉴别诊断的要求。结论：应用免疫细胞化学技术对肿瘤性骨髓涂片进行抗原标记，取得了良好的效果，有助于明确疾病的鉴别诊断。 　　【关键词】 骨髓检查；免疫组织化学；诊断 　　 　　免疫组化在外科病理学上已经被广泛应用，但常规应用于细胞学上还不多，而在细胞病理学中面临的主要问题是弄清细胞的来源和性质，传统的形态学方法和标准能满足多数分化细胞的分类和诊断，但对难以辨认的肿瘤细胞，免疫细胞化学（ICC）在细胞病理学中是一很有用的辅助诊断方法，结合免疫细胞化学，可达到准确鉴别诊断的要求。但多数免疫细胞化学在胸腹水恶性肿瘤的应用，在骨髓涂片上直接进行免疫细胞化学标记进行明确诊断少见报道。笔者应用免疫细胞化学技术对肿瘤性骨髓涂片进行抗原标记，取得了良好的效果，有助于明确疾病的鉴别诊断。 　　1 临床资料 　　1.1 一般资料 　　选取我院10例患者恶性骨髓涂片，骨髓涂片诊断尚有困难或怀疑有其他转移性肿瘤但又无法活检明确诊断的骨髓涂片。 　　1.2 试剂 　　小鼠抗人CK、CD20、CD79a、CD3、CD43、CD45RO、CD56、Syn、LCA、及MaxVision试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。 　　1.3 免疫细胞化学方法 　　（1）根据临床病史及常规HE初步诊断，对抗体筛选不同抗体的标记；（2）观察骨髓涂片细胞量（除红细胞）较多的区域，并用免疫组化笔划圈直径约1cm，太小细胞量少且玻片容易干燥，过大浪费抗体；（3）骨髓涂片放入乙醇乙醚固定液固定5min，水洗5min，PBS液冲洗，一抗室温孵育1h；PBS液冲洗，二抗室温孵育15min；PBS液冲洗，DAB显色；PBS代替一抗作阴性对照。最后苏木精复染，中性树胶封固。 　　取骨髓液3-5ml肝素抗凝，Ficoll液分离单个核细胞，用PBS洗涤3次，调细胞浓度为1-2×106/ml，甩片凉干。甲醇：丙酮（1：1）固定细胞，置于10mmol/L的PBS液洗涤3次，每次2分钟，滴加1抗，然后PBS液洗涤3次，每次2分钟，再加入生物素化??联2抗，室温湿盒中放置30-45分钟，PBS洗涤3次，每次2分钟，二氨基联苯胺（DAB）液显色。显微镜下观察显色情况，适时流水终止反应，苏木素复染细胞核。细胞膜浆或细胞核中见到明显的棕黄色为细胞阳性。根据需要采用不同抗体组合。 　　1.4 结果判断 　　CK（Pan）、CD20、CD79a、CD3、CD43、CD45RO、CD56、Syn、LCA阳性均定位于细胞膜或细胞浆，抗体均定位比较准确，背景不明显。 　　2 结果 　　10例骨髓涂片中。其中1例CK（Pan）、CD56和Syn阳性表达，结合形态学观察，诊断为转移性小细胞癌，该患者有食管小细胞癌手术病史。结合骨髓涂片诊断淋巴细胞增生免疫细胞化学既有T系抗原表达又有B系抗原表达4例；单克隆B系表达3例；单克隆T系表达2例。 　　3 讨论 　　传统血液形态学是以外周血涂片和骨髓涂片为主的细胞形态学检验，时至今日仍是血液病诊断重要的方法。但是，我们也应该清醒地看到，由于血细胞自动分析仪和分子生物学等新技术对传统血液形态学检验的影响，有必要强调和正视传统血液形态学检验自身的价值和存在的问题。有90%的淋巴瘤患者有克隆性染色体异常，不同类型常有特异性的改变。如滤泡细胞淋巴瘤常发生t（14；18）；伯基特淋巴瘤t（8；14）；套细胞淋巴瘤t（11；14）；间变性大细胞淋巴瘤t（2；5）；弥漫性大细胞淋巴瘤易见t（3；var）等。本组结果也证实了部分染色体核型与淋巴瘤分型相关，其中1例ALCL发生罕见的t（2；3）（p23；q21），但本组异常核型检出率较文献报道低。本文7例骨髓轻度受累患者中2例检出核型异常。部分淋巴瘤患者的骨髓像细胞形态显示为正常，但检出异常染色体核型。上述结果提示细胞遗传学检查对发现NHL早期骨髓浸润有独特的诊断价值。 　　目前骨髓疾病病理诊断一般采用骨髓活检的方式进行，骨髓活检对转移性肿瘤、白血病、淋巴或髓性增殖性疾病等都能结合免疫组织化学进行明确诊断。骨髓涂片一般在医院检验科或血液科进行诊断，但有些骨髓涂片存在诊断困难或怀疑有转移性肿瘤，无法活检明确诊断，可直接在骨髓涂片上进行相应免疫抗原标记来明确诊断。免疫细胞化学对肿瘤鉴别诊断及寻找肿瘤原发灶起着十分重要的作用。随着细胞学新技术的发展，免疫细胞化学应用到体液细胞学、针吸细胞学及骨髓涂片细胞学上，为疑难病例的鉴别诊断、临床治疗提供帮助。临床上有些患者肿瘤细胞已经转移至骨髓。但原发灶有时很难找到，那么骨髓