电泳法 - 浙江大学.pptVIP

电泳法 电泳法：在电解质溶液中，带电荷供试品在电场作用下，向对应的电极方向按不同的泳动速度而进行泳动并且分离的分析方法。 特点：操作简便、灵敏度高、重现性好、检测范围广。具分离、分析优点，可进行定性、定量分析。特别适合于蛋白、核酸等大分子物质的分离。是生化药物、基因工程药物分析的重要手段。 电泳法分类 自由界面电泳：U型管，最早应用 区带电泳：广泛应用。种类多。（纸电泳、纤维薄膜电泳、PAGE、SDS） 高效毛细管电泳（HPCE） 区带电泳 纸电泳： 以滤纸为支持载体。 自醋酸纤维薄膜用作支持物以来，以逐渐被替代。后者分离清晰、分离速率快、样品用量少、操作简便。 纸电泳 eg.ATP的含量测定：枸橼酸缓冲液（枸橼酸-枸橼酸钠PH3.0）；紫外检视；剪下斑点以盐酸浸泡洗脱，空白滤纸对照，测定吸收度定量 区带电泳 醋酸纤维素薄膜： 以醋酸纤维素薄膜为支持载体。用于血清蛋白、脂蛋白的分离、定量。 eg.分离血清白蛋白：巴比妥缓冲液（巴比妥-巴比妥钠PH8.6）。 区带电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE) 聚丙烯酰胺凝胶为支持载体。电荷/分子大小，分子筛原理分离。 聚丙烯酰胺凝胶电泳 不连续体系：利用不连续的缓冲溶液、PH值和凝胶孔径进行电泳。PAGE以盘状电泳最为常用，属于不连续体系。盘状电泳管中置三种不同的凝胶