具有较高基因沉默效应的siRNA设计-厦门大学学术典藏库.PDF

第 44 卷 　增 刊 ( ) Vol . 44 　Sup . 厦门大学学报 自然科学版 　2005 年 6 月 J our nal of Xiamen U niver sit y (N at ural Science) J un . 2005 　 具有较高基因沉默效应的 si RN A 设计 王玉倩 ,李勤喜 (厦门大学生命科学学院 ,福建 厦门 36 1005) 摘要 : 详细说明了如何通过对特定基因 mRN A 序列进行分析设计具有较高基因沉默效应的 siRN A 方法 ,并应用该方法 针对小鼠早幼粒细胞白血病基因 p m l3 设计相应的 siRN A . 通过 R TPCR 和 West ern Blot 的方法 ,验证了其对 p m l3 基因 表达的抑制效果 ,实验证明通过我们提出的方法所设计的 siRN A 具有较高的基因沉默效应. 关键词 : RN A 干涉 ; siRN A ;基因沉默 中图分类号 : Q 754 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 (2005) Sup0 15004 　　在现在分子生物学研究中 ,经常需要抑制某基因 [ 1 ] 1 　材料与方法 ( 的表达而达到实验 目的 . 由于 RN A 干涉 RN A in ) ( t erf erence ;RN Ai 技术能够抑制特定基因的活性 基 1 . 1 　si RN A 序列的设计 ) [2 ] 因沉默 , 目前已经得到广泛的使用 . 这种基因沉默 1. 1. 1 根据 m RN A 的序列初步选择 si RN A 序列 效应是通过降解序列特异性的 m RN A 而实现的. 在这 首先 ,在 ht tp :/ / de sign . dhar macon . siRN A 网站 一过程中 ,双链 RN A (doublest randed RN A ;dsRN A) ( 中 ,提交靶基因 p m l3 的全序列 其在基因库中的序号 被一种核糖核酸酶 Dicer 切为 2 1～23 bp 的片段 , 即 GI 为 3 1342552) ,并选择设计 si RN A 的条件 ,例如起 siRN A ( short int erf erin g RN A ) . 这种小分子 RN A 可 始核苷酸种类 , GC 含量 ,靶序列区域等. 程序通过分 以被一种蛋 白复合体 RN A 介导的沉默复合体 析该基因与 Genebank 中其它基因的同源性 ,初步给 ( RN Ainduced silencing co mp lex , R ISC) 识别并