实验金属核酸酶—铜邻菲啰啉配合物的合成及与DNA相互作用.ppt

金属核酸酶—铜邻菲啰啉配合物的合成及与DNA相互作用 化学生物学实验课程组 张荣兰 实验一 创新实验I-化学生物学 化学国家级实验教学示范中心 NORTHWEST UNIVERSITY 工具酶：人工金属核酸酶切割或水解核酸 核酸酶：天然核酸酶、人工金属核酸酶 核酸技术：DNA纯度、DNA构象变化 分子识别：相互作用 Your site here 实验技能训练要点 主要新知识 仪器分析：光谱技术-紫外分光光度计、荧光光谱仪 电化学分析技术-电化学工作站 化学生物学导论：核酸技术 生物无机化学：人工金属核酸酶的研究技术 无机化学与化学分析：配合物反应的原理和操作方法 配合物表征技术 Your site here 实验技能训练要点 主要知识回顾 过渡金属离子配合物在识别核酸结构和核酸断裂方面具有独特的性质，被称为人工金属核酸酶。 Sigman发现第一个金属核酸酶（铜的邻菲咯啉配合物） 人工金属核酸酶既有限制性内切酶的高度专一性，又能在人们预先设计的任何位点断裂DNA，克服了传统的限制性内切酶识别位点仅为4～8个核苷酸的限制 金属核酸酶中遴选出一些与基因有关的疾病的“诊断试剂”和化学治疗药物。 背景知识 关键词：人工金属核酸酶、DNA相互作用 Artificial metallonuclease、DNA interaction 传统的限制性核酸内切酶 人工金属核酸酶 西北大学化学与材料科学学院 实验内容提要 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器与试剂 六、实验延伸 五、实验结果与讨论 四、实验步骤与方法 思考题 参考文献 一、实验目的 熟练掌握配合物合成反应的原理和操作方法； 熟练掌握DNA纯度的紫外分光光度法测定； 掌握紫外光谱、荧光光谱仪的原理及其在生物大分子构象表征中的应用。 通过溶液中的直接配位作用制备人工金属核酸酶—铜邻菲啰啉配合物，使学生了解用配位化学的原理和方法，了解分子识别及其在分子水平上金属配合物与生物分子（DNA）的相互作用。 二、实验原理--金属核酸酶铜邻菲啰啉配合物的合成 作用方式 共价结合 非共价结合 插入结合 沟面结合 静电结合 配位结合 a 金属配合物与DNA作用的基本形式 二、实验原理--配合物与DNA作用方式 b 金属配合物与DNA作用的研究方法 电子吸收光谱 电子发射光谱 线二色谱 (Linear Dichroism, LD)和圆二色谱(Circular Dichroism, CD) X-射线衍射和NMR谱 电化学方法 流体力学方法 密度泛函理论计算(density functional theory DFT) 二、实验原理--配合物与DNA作用方式 西北大学化学与材料科学学院 三、实验仪器和试剂 水合氯化铜、邻菲啰啉、无水乙醇、 无水乙醚、Tris-HCl、小牛胸腺DNA 试剂 西北大学化学与材料科学学院 三、实验仪器和试剂 磁力搅拌器 旋转蒸发仪 圆底烧瓶 烘箱 日立F-4500荧光光谱仪 紫外-可见分光光度计 仪器 酶解 DNA片段 恒温水浴 核酸电泳 金属配合物与金属核酸酶作用比较 第4天 天数 实验内容 实验准备 相关知识点 第1天 铜的邻菲啰啉配合物合成 圆底烧瓶、烧杯 旋转蒸发仪 金属配合物 第2天 制备铜的邻菲啰啉配合物制备与表征 熔点仪 计算产量 DNA构象变化 第3天 金属核酸酶与DNA作用 紫外分光光度计、荧光光谱仪 DNA紫外吸收特点，分子识别 第4天 数据处理、整理 实验报告 研究论文的撰写 环节1 环节2 环节3 四、实验步骤与方法—实验天数 四、实验步骤和方法 配合物Cu(phen)2Cl2的合成 a 反应装置示意图 1. 磁子搅拌器；2.圆底烧瓶；3.铁架台 b 实验操作流程 四、实验步骤和方法 称取0.180 g (1mmol/L) 邻菲啰啉 称取0.085g(0.5mmol/L) 二水合氯化铜 50mL的烧瓶 12mL无水乙醇 8mL无水乙醇 邻菲啰啉 溶液 50mL的烧瓶 二水合氯 化铜溶液 搅拌5h 反应液浓缩至15mL 置于冰箱冷却过夜 析出晶体抽滤 无水乙醇淋洗 二水合氯 化铜溶液 弃去母液 真空干燥 称重、计算产量、测定熔点 2. 配合物Cu(phen)2Cl2与DNA作用 四、实验步骤和方法 配制Tris缓冲液 配制含DNATris缓冲液 配制含配合物Tris缓冲液 吸收光谱 发射光谱 循环伏安 分析数据 判断与DNA作用方式 五、实验结果与讨论 Cu(phen)2Cl2 g；产率