房颤大鼠心房肌细胞膜超速延迟整流钾通道kv1.5蛋白和mrna的表达及结构研究-study on the expression and structure of kv 1.5 protein and mrna in atrial myocyte membrane of atrial fibrillation rats with ultradelayed rectifier potassium channel.docxVIP
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房颤大鼠心房肌细胞膜超速延迟整流钾通道kv1.5蛋白和mrna的表达及结构研究-study on the expression and structure of kv 1.5 protein and mrna in atrial myocyte membrane of atrial fibrillation rats with ultradelayed rectifier potassium channel
独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其 他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和 集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人 承担。学位论文作者签名:日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅 和借阅。本人授权青海大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于:保密□不保密□(请在相应方框内打“√”),在年解密后 适用本授权书。学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日摘 要目的:通过检测房颤大鼠心房肌细胞膜上超速延迟整流钾离子通道 KV1.5 蛋白 及 mRNA 的表达变化,探讨两者变化的相关性及相应通道蛋白改变在房颤时心肌 电重构中的意义,进一步阐述心房肌心肌电重构在房颤发病机制中的作用;同 时制作大鼠心房肌组织切片,观察其形态结构,探讨心房结构重构在房颤发生 和维持中的作用及意义。方法:取 SD 实验大鼠 25 只,雄性 13 只,雌性 12 只,平均体重 217.64±7.02克。随机分为两组:实验组 15 只,对照组 10 只。实验组于尾静脉按 0.1mL/100g注射混合药物(内含 CaCl2 10 mg/mL,Ach 66 μg/mL),每天 1 次,共 1 周进行房颤造模;对照组按同样方法注射等体积生理盐水。分别于实验前及 1 周 后行心电图检查并记录,按房颤组和对照组进行标记。1 周后处死所有大鼠,各 取心房组织约 50 mg。用裂解液 RZ 试剂匀浆提取标本总 RNA 后,行电泳对其 进行质量分析及紫外光分光光度仪测定分析其纯度和浓度。RT-PCR 扩增目的基 因,测定各标本 DNA 含量从而分析相应 mRNA 的表达情况;余心房组织放入 已标记含足量 20%甲醛液体瓶中浸泡固定,常规梯度酒精脱水,正丁醇浸泡, 二甲苯透明处理后石蜡包埋用于免疫组化染色及切片标本制作,检测其 KV1.5 蛋白表达及组织形态结构变化。结果:○1 大鼠尾静脉注射乙酰胆碱和氯化钙混合液后,出现典型的心房颤动: 心电图示P波消失,代之以大小形态不一的小“f”波,心律绝对不齐,R-R 间期不等。○2 房颤组大鼠 KV1.5 mRNA 平均含量相对比值为: 0.613±0.040;对照 组为: 0.848±0.036,两组数值比较差异有显著性统计学意义(t=13.777, p<0.01)。○3 房颤组大鼠 KV1.5 免疫组化蛋白平均光密度值为: 0.0896±0.0048;对照组为: 0.1109±0.0033,两组数据比较差异有显著性统计学意义(t=11.047, p<0.01)。○4 两组大鼠心房肌组织切片比较:对照组大鼠心房组织标本切片显示 心外膜不厚,心肌纤维清晰,无肌凝、肌溶,心肌细胞间质间隙略增宽,心内膜未见异常;实验组大鼠心肌出现不同程度的心肌断裂、肌溶、心肌肥大、炎 性细胞浸润、灶性坏死、纤维组织增生等病理性改变。结论:○1 房颤大鼠心房肌细胞膜超速延迟整流钾通道 KV1.5 mRNA 和蛋白的表 达均下降,两者的变化方向一致。该改变可能是机体的一种代偿性保护机制, 使动作电位时程有效不应期延长,抑制房颤折返形成。○2 房颤大鼠心房肌结构I重构明显。该改变为房颤所致心房肌缺血缺氧的结果,降低其代偿储备功能,使心房肌组织结构损伤从代偿转入失代偿,从生理性适应转为病理性改变,最 终导致心房结构的不可逆性损伤并渐至结构重构。○3 房颤可导致心房结构重构, 而心房结构重构又使其相应功能减低、失代偿甚至丧失,房颤又易于发生和维 持。因损伤因素的诱导致结构和功能相互作用并最终加重心房结构损伤,不利 于其结构的恢复进而出现严重的心肌电紊乱。关键词:心房颤动心电描记术电生理学离子通道逆转录聚合 酶链式反应IIAbstractObjective: To investigate the correlation between the expressions of protein and mRNA in ultra-rapid delayed rectifier potassium ion channel KV1.5 of atrial myocyte membrane in atrial fibrillation rats and the significance of corresponding channelprotein changes in i
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