菲律宾蛤仔(venerupis philippinarum)在硫丹胁迫下毒性效应与分子生物标志物的研究-study on toxic effects and molecular biomarkers of ruditapes philippinarum under endosulfan stress.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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菲律宾蛤仔(venerupis philippinarum)在硫丹胁迫下毒性效应与分子生物标志物的研究-study on toxic effects and molecular biomarkers of ruditapes philippinarum under endosulfan stress.docx

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菲律宾蛤仔(venerupis philippinarum)在硫丹胁迫下毒性效应与分子生物标志物的研究-study on toxic effects and molecular biomarkers of ruditapes philippinarum under endosulfan stress

一定染毒时间内呈峰值变化；与对照组相比，两组织中 SOD 活力在低浓度处理组首先被诱导，随后降低并逐渐恢复至对照组水平（P＞0.05），但在 0.05μg/L 和0.5μg/L 处理组均被显著抑制，且在一定染毒时间内呈峰值变化；两组织中0.005μg/L 硫丹处理组 F 值（DNA 损伤水平）在 3d 内呈峰值变化，于 3d 达到最小值，并于 3d 后逐渐恢复至对照组水平（P＞0.05），在 0.05μg/L 和 0.5μg/L 处理组，两组织的 F 值在染毒 1d 时就显著减小（P0.05），随着染毒时间的延长慢慢升高，但仍显著低于对照组水平（P0.05），鳃丝和消化盲囊组织中 F 值表现出相似的变化趋势。由此可见，硫丹对菲律宾蛤仔虽没有明显的急性毒性作用，但组织解毒代谢酶活力、抗氧化指标变化和 DNA 损伤水平与硫丹浓度表现出明显的时间-剂量效应关系，而且相关性分析可知，菲律宾蛤仔鳃丝和消化盲囊组织 GST 活力、SOD 活力、LPO 水平以及 DNA 损伤水平与硫丹染毒浓度呈线性相关性，可作为硫丹海洋污染监测的潜在生物标志物。2 菲律宾蛤仔在硫丹胁迫下差异基因的筛选与表达分析本研究采用抑制性消减杂交技术（SSH）分别成功构建了 1 d 和 10 d 硫丹胁迫下（0.5μg/L）菲律宾蛤仔正、反向 cDNA 消减文库，测序分析结果显示，1d 正、反向消减文库中分别含有 56 种和 50 种 Unigene 与 GenBank 中的己知功能序列具有较高的同源性（E0.1）；10d 正、反向 cDNA 文库中分别有 40 种和 72 种 Unigene 与 GenBank 中的己知功能序列具有较高的同源性（E0.1）。对 EST 序列进行功能注释分类结果表明，这些差异表达基因主要与以下功能相关：转录及转录后修饰、翻译、能量产生和转换、外源物质解毒、机体免疫、机体代谢等，还有一些其它未分类基因。ESTs 序列信息均已提交至 Genbank 数据库，cDNA 消减文库编号为 LIBEST_027859 ，部分基因的 GenBank 序列号为 JK845831-JK845901。对差异表达基因在不同浓度硫丹（0.05 和 0.5μg/L）胁迫下的荧光定量实验结果显示，Cathepsin L2、Amine sulfotransferase（SULT）、AChE 和 Hydroxysteroid (17-beta) dehydrogenase 等基因的表达水平与硫丹浓度有一定的时间-剂量效应关系，可作为硫丹污染监测的潜在分子生物标志物。关键词：菲律宾蛤仔；硫丹；解毒代谢酶；生物大分子损伤；差异表达基因；生物标志物Study of toxicity effects and molecular Biomarkers of ClamVenerupis philippinarum Exposed to EndosulfanAbstractEndosulfan (EDS) is an organochlorine (OC) compound that has been classified as highly toxic by the majority of environmental protection agencies. In present study, the acute toxicity and sub-chronic toxic effects of endosulfan on clam Venerupis philippinarum were studied from enzymology and molecular level. The subtractive cDNA library of Venerupis philippinarum exposed to endosulfan was constructed by suppression subtractive hybridisation (SSH) and differentially expressed genes were identified. The resulting data may provide reference for endosulfan toxicity effect study especially the toxicity research on aquatic invertebrates. Studies on the construction of subtractive cDNA library and the differentially expressed genes may provide basic