肺癌射频消融后cd4t细胞亚群变化及其临床意义的初步探讨-preliminary study on changes of cd4t cell subsets and their clinical significance after radiofrequency ablation of lung cancer.docxVIP

中文摘要目的初步研究正常人群外周血CD4+T细胞亚群Th1、Th2、Th17、Treg细胞的水平和肺癌射频消融（Radiofrequencyablation，RFA）治疗后CD4+T细胞亚群的变化，通过对照分析初步探讨CD4+T细胞亚群变化的临床意义。材料与方法选择30例健康人作为正常对照组，根据肺癌患者在各年龄段及性别分布比例确定对照组各年龄段的男女例数，于清晨空腹抽取外周静脉血进行流式细胞术检测。6例经皮穿刺病理活检证实为肺癌的患者，采用气管插管下静脉麻醉，在CT引导下行RFA治疗，分别于治疗前及治疗后半月、1月、2月、3月清晨抽取空腹外周静脉血进行流式细胞术检测。Th1、Th2、Th17细胞的代表因子分别是IFN-γ、IL-4、IL-17，采用全血胞内染色法检测细胞因子间接分析Th1、Th2、Th17细胞水平，用佛波酯(PMA)、离子霉素(Ionomycin)刺激细胞因子表达，并用蛋白转运抑制剂（BrefeldinA，BFA）阻断其分泌到胞外，以荧光素偶联的单克隆抗体CD3—PE-Cy5、CD8—APC-Cy7、IFN-γ—APC、IL-17—FITC及IL-4—PE对细胞表面抗原及胞内细胞因子直接标记，染色后用BDFACSCanto流式细胞仪测定各项指标，以FACSDiva软件分析Th1、Th2、Th17细胞占CD4+T细胞的百分率。Treg细胞的特征表型分子是CD3+CD4+CD25+foxp3+，转录因子foxp3是位于细胞内部的特征性表型分子，采用全血胞内染色法检测胞内抗原分子以分析Treg细胞水平，以荧光素偶联的单克隆抗体CD3—APC、CD4—PE-Cy5、CD25—FITC及foxp3—PE对细胞表面及胞内抗原分子直接标记，染色后用BDFACSCanto流式细胞仪测定各项指标，以FACSDiva软件分析Treg细胞占CD4+T细胞的百分率。正常健康人检测结果采用SPSS13.0统计软件进行统计描述分析；6例肺癌RFA治疗术前、术后CD4+T细胞亚群水平直接采用平均数进行趋势分析。结果正常人群外周血Th1、Th2、Th17及Treg细胞水平分别为：36.88%±9.43、1.01%±0.56、3.03%±1.00、1.83%±1.07，Th1/Th2比值53.09±38.35。肺癌患者术前外周血Th1细胞水平I低于正常对照组，而Th2、Th17、Treg细胞水平高于正常对照组，Th1/Th2比值低于正常对照组。与术前相比，肺癌RFA治疗半个月后，Th1细胞升高，Th2、Th17、Treg细胞降低，术后1、2、3个月，Th1细胞升高及Th2、Th17、Treg细胞降低趋势出现波动，但Thl细胞水平仍高于术前，Th2、Th17及Treg细胞水平仍低于术前。Th1/Th2比值也在术后半月升高，3个月内比值有变化，但仍高于术前。结论正常人群外周血CD4+T细胞亚群以Th1细胞为主，其水平明显高于Th2、Th17及Treg细胞。肺癌患者外周血Thl细胞降低、Th2细胞升高使Thl/Th2细胞免疫失衡，削弱了机体抗肿瘤免疫功能，Th17细胞升高促进肿瘤血管及淋巴管形成有利于肺癌生长、转移，Treg细胞升高与肿瘤转移、病情发展有关。RFA术后Thl细胞升高、Th2细胞下降，纠正了肺癌Thl/Th2细胞免疫失衡，外周血Th17、Treg水平下降，是RFA术后取得疗效、预后改善的指标。关键词肺癌；射频消融；流式细胞术；CD4+T淋巴细胞亚群IIAbstactPurposePreliminarystudyonperipheralfourdistinctCD4+T-cellsubsetsincludingTh1,Th2,Th17andTreginhealthyindividual.AndpreliminarystudyontheclinicalsignificanceanddynamicchangeofCD4+T-cellsubsetsinlungcancerpatientsbeforeandaftertheRadiofrequencyablation(RFA)therapy.MaterialsandMethodTheperipheralheparinizedbloodsampleswereobtainedfrom30healthycontrolsand6patientswithlungcancerbeforeand0.5,1,2,3monthafterRFA.PercutaneousRFAwereperformedundercomputedtomographic(CT)-guidedandintravenousanesthesia.FourdistinctCD4+T-cellsubsetsTh1,Th2,Th17,Tregwer