日本囊对虾雌雄性腺差异表达基因的克隆与研究-cloning and study of differentially expressed genes of male and female gonads in penaeus japonicus.docx

第一章 引言 1.1 日本囊对虾形态特征、自然分布及生活习性 日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus），属于节肢动物门甲壳纲，十足目，枝腮亚 目，对虾科，对虾属。日本囊对虾俗称竹节虾、兰尾虾、蚕虾、花虾，日本称为车虾，在 台湾称为斑节虾[1]。其甲壳上花纹艳丽，有十几条棕色和蓝色相间的横纹，附肢黄色，尾 肢后部色泽鲜艳。额角微呈正弯弓形，上缘8～10齿，下缘l～2齿[2]。 日本囊对虾的分布广泛，从红海、非洲的东部到朝鲜、日本一代沿海都有分布，我国 的东海、南海也有分布。在自然海域中，日本囊对虾栖息的水深范围较广，从几米到100 多米水深均有分布，幼虾栖息在较浅的水域，成虾栖息于较深的水域，并在那里成熟、产 卵[3]。成熟的雌虾一般体长为130-160 mm；成熟的雄虾个体一般体长为110-140 mm。由于 日本囊对虾的肉质鲜美，营养丰富，且具有较耐低温，活力强，耐干露，适合鲜活销售等 特点，因此成为重要的养殖对象[1]。 雌性日本囊对虾有一对卵巢，贯穿整个身体的背面，在未成熟时，卵巢呈白色，成熟 时呈暗绿色，左右两边的卵巢都呈叶状，各叶分别向前方、侧方、和后方延伸。雌虾的卵 巢随着发育，色泽从白色变为浅绿色、灰绿色、成熟的时候呈暗绿色。雄性对虾具有1对 精巢,包括1对前叶和1对短小的后叶以及8对侧叶。未成熟的精巢呈无色透明状，成熟的则 呈乳白色[2]。 日本囊对虾适温范围为10-32℃最适的生长温度是20-30℃[2]，日本囊对虾繁殖期较长， 每年2月中旬至10月中旬均可产卵，产卵盛期为5月-8月。我国沿海1～3月份及9～10月份 均可捕到亲虾，产卵盛期为每年12月～翌年3月份。日本囊对虾有多次发育、多次产卵现 象。雌虾性腺发育成熟或接近成熟时便可产卵。产卵行为多发生在夜间，前期集中在 20:00-24:00，后期则集中在0:00-4:00，其产卵量因个体大小及产卵时卵巢的成熟度不同 而异，一般在20万粒-60万粒，个别可达100 万粒。产卵时，雌虾在水中层游动，成熟卵 子从雌性生殖孔排出体外的同时，贮存在纳精囊里的精子也排出体外，精子和卵子在水中 受精。产卵的同时雌虾划动游泳足，使卵子均匀分布于水中，并有助于受精[3]。 1.2 性腺发育及性别分化的相关研究 性腺发育和性别分化机制一直是生命科学领域的重要课题。特别在哺乳动物，近年来， 随着分子生物学技术的发展和应用，一些与性腺发育和性别分化有关的重要基因先后得到 克隆与鉴定。 20 世纪 60 年代前后,人们证实哺乳动物睾丸的发育依赖于 Y 染色体,并推测是由于 Y 染色体上的一个基因能编码睾丸决定因子(TDF) ,后者决定了生殖嵴分化发育成睾丸[4]。 1990 年,Sinclair 等人从 Y 染色体上克隆得出性别决定区( sex determing region of Y chromosome)基因[5] ,即 SRY 基因。Koopman 将含有 SRY 的片段导入 XX 雌性胎鼠中,部分 小鼠睾丸开始发育,发生性逆转[6]。现在普遍认为 SRY 是一个或多个基因,在人是含有 35 Kb 的 DNA 片段，位于 Y 染色体的短臂上,在小鼠中是 14 kb。它编码一个含 204 个氨基酸， 具有高度保守性的蛋白。其中的 80 个氨基酸与 DNA 结合的保守区域,叫做 high mobility group (HMG)区域[7,8]。 其他性别决定和性腺发育相关的基因也有相关的报道。例如，Nusbaun 等在秀丽隐杆 线虫中发现了新的X染色体的绑定基因：sdc-2，它控制雌雄同体模式（XX）的性别决定以 及X染色体计量补偿，sdc突变体会引起性别决定的模式，引起XX动物表现出XO的表型[9]。 Yamano 等采用 mRNA差异显示技术( mRNA Differential Display）获得了一个大鼠精子 发生相关因子SRP-1( Spermatogenesis Related Factor 1) ,且这个基因只在精巢中表达， 原位杂交显示 SRP-1 主要表达在精母细胞中 [10 ] 。 Zeng 和 Schultz 采用抑制削减杂交 （Suppression Subtractive Hybridization）获得了一些小鼠不同发育时期的特异基因 ZP1, ZP2, GDF-9, BMP15, 和H1 ，发现这些基因特异地出现在卵母细胞中，但是没有出 现在 8 细胞时期的胚胎中 [11] 。 O’Shaughnessy 等采用 基因表达系列分析技术（ Gene Expression Serial Analysis Technique）研究了参与调节小鼠精巢发育的基因，发现了 多个在胎儿或成熟的精巢中的差异表达序列片段[12]。Rattn