抗体检测技术ppt课件.ppt

PA法 （2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒） 以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血清样品。 斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。 斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。 阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内，使用抗原量少。 快速诊断试剂 金标诊断试验原理 快速诊断试验 （3）免疫层析试验(金标法、硒标法) 以硝酸纤维膜为载体。 加样区：预包被胶体金-抗原/胶体金-protein A结合物 测试区（T）：固定有重组HIV抗原， 质控区：抗HIV单克隆抗体/抗-protein A抗体 快速诊断试剂 全血样品 加50ul样品于样品垫中 手指血方法 静脉血方法 加一滴缓冲液 15分钟内读取结果 硒标法操作步骤 病人条 质控条 快速诊断试验 优点:试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。不需专门设备和人员培训,一般可在10～30分钟内得出结果。 缺点:肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。 注意：一定要将试剂平衡至室温 快速诊断试剂 HIV抗体确认试验 确认试验的试剂： 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 确认试验方法： 免疫印迹试验(WB) 条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ) 放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA) 国内常用的确认试验方法是WB。 HIV抗体确认实验结果 a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p39 p31 P24 p17 血清对照 HIV-2特异带 HIV核酸定性检测 规定了核酸检测、核酸序列测定的实验室条件、检测方法及结果判定标准 结果报告 ： HIV核酸检测阴性:只可报告本次实验结果阴性。 HIV核酸检测阳性:可作为诊断HIV感染的辅助指标，不单独用于HIV感染的诊断。 严格的实验室管理制度（分区、仪器和材料的专用、单向流向、废弃物处理） HIV RNA定量测定（病毒载量测定） 方法 常用的HIV RNA定量测定方法有逆转录PCR试验（RT-PCR）、核酸序列扩增试验（NASBA）、分支DNA杂交试验（bDNA）。 HIV核酸定量检测的意义 辅助诊断：当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（3，000c/ml），感染发生的可能性非常大。应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。 早期诊断 ：HIV感染孕妇所生婴儿 、↓残余危险度 病程监控 ：确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。 指导治疗方案及疗效判定 ：通常在治疗前后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。 预测疾病进程 适用范围： ★HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断； ★ HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断； ★第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断； ★监测病程进展和抗病毒治疗效果。 检测方法：通常是采用ELISA双抗体夹心法。 HIV P24抗原的检测 结果报告和解释 HIV-1 P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认，若阳性标本的OD值比中和反应前减少50%以上，才确定为HIV P24抗原结果阳性。 HIV-1 P24抗原阳性仅作为HIV感染窗口期的辅助诊断依据，不能据此确诊。 HIV-1P24抗原检测的敏感性为30?90％，低于病毒载量测定。HIV-1P24抗原阴性结果只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。 样　　本 初筛检测 一阴一阳 均阳性反应 阴性报告 送确认 重复检测 阴性报告 均阴性反应 阳性反应 原有试剂＋另一 种原理初筛试剂 选用初筛试剂 阴性反应 HIV抗体筛查检测流程图 筛查试验阳性反应样品 HIV抗体确证检测流程图 结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展或呈阴性反应， 则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报告阳性；如随访期间带型有进 展，但不满足阳性标准，应继续随访到8周。如带型没有进展或呈阴性反应 则报告阴性；满足HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准 可视情况决定是否继续随访。 确证试剂 根据具体情况