矮丛蓝莓叶片愈伤组织培养研究.docVIP

矮丛蓝莓叶片愈伤组织培养研究 　　摘要:以2种矮丛蓝莓的幼叶为外植体,进行愈伤组织形成及分化的研究。结果表明,在WPM培养基中附加不同种类、浓度的激素,2种蓝莓均能产生愈伤组织并分化出不定芽;在1/2MS+IBA培养基中添加活性炭时,生根效果最好。对于2个品种而言,叶片基部均是适宜诱导愈伤组织的部位。 　　关键词:矮丛蓝莓;幼叶;愈伤组织 　　中图分类号:S663.9 文献标识码:A 文章编号:1674?9944(2010)10?0185?04 　　1 引言 　　矮丛蓝莓(?Vaccinium angustifolium?),属杜鹃花科(?Ericaceae?)越橘属(?Vaccinium?)植物,主要分布在北美和欧洲,具有很高的保健和经济价值。在保健方面,其特定的抗氧化剂具有延缓衰老、抑制癌细胞活性、抵抗心脏疾病的作用;在经济方面,市场需求量大,应用范围广[1]。但是,矮丛蓝莓常规的种子繁殖周期长,难以满足规模化生产和批量上市的需要。因此,组织培养凭借其无性繁殖的独特优势,成为蓝莓脱毒与快速繁殖的主要途径。在组织培养研究中发现矮丛蓝莓的茎尖和茎段表面及内部都带菌,不利于外植体灭菌和建立无菌材料。而其幼叶灭菌相对容易,且外植体采集对原母株伤害小。因此,幼叶成为矮丛蓝莓组培时首选的接种材料。本文以2种矮丛蓝莓的幼叶为接种材料,系统研究了不同生长调节剂组合、不同光照、不同部位对愈伤组织诱导与分化的影响,及植株再生途径,以期为矮丛蓝莓组培苗工厂生产提供理论依据和技术支撑。 　　2 材料与方法 　　2.1 试验材料 　　以“北极星”(Polaris)、“美登”(Blomidon)2个品种为材料,取其新抽生并完全伸展的幼叶进行试验。 　　2.2 试验方法 　　2.2.1 材料处理 　　剪下幼叶后流水冲洗2h,在无菌操作台上按照70%酒精消毒30s,无菌水冲洗3次,0.05%氯化汞灭菌8min,无菌水冲洗8次的顺序进行材料表面灭菌。然后将幼叶用无菌滤纸吸干水分,备用。 　　2.2.2 叶片愈伤组织的诱导 　　将幼嫩叶片横切2~3刀,背面朝下,接种于培养基上,每瓶接种3~5个叶块,30d后观察统计愈伤组织诱导情况及生长状态,图1。 　　图1 叶片愈伤组织诱导 　　(1)不同生长调节剂组合对叶片愈伤组织诱导的影响。将叶片接种在WPM培养基上,添加不同浓度的6-BA、NAA、2,4-D,采用L?9(3?4)正交试验做3因???3水平处理,30d统计出愈率和愈伤组织长势,具体处理见表1。 　　(2)叶片的不同部位对愈伤组织诱导的影响。将幼嫩叶片垂直主脉切割两刀,分成3个小叶块,接种在培养基WPM+6-BA1mg/L +NAA0.1mg/L+2,4-D2mg/L上,30d后观察统计叶片的出愈率和生长状况。 　　(3)不同光照条件对叶片愈伤组织诱导的影响。将幼嫩叶片分别进行全光培养、10d暗培养、20d暗培养,全暗培养,观察记录叶片的出愈率和生长状况,如图2。 　　图2 愈伤组织分化的不定芽 　　2.2.3 愈伤组织分化培养 　　将培养30d是生长良好的愈伤组织切成边长约为0.5cm的正方体的小块,接种于附加不同浓度生长调节剂的1/2MS分化培养基中,诱导愈伤组织产生不定芽。每瓶接种外植体3个,每处理接种30瓶,重复3次。30d统计不定芽诱导率,具体处理见表2。 　　2.2.4 壮苗及生根培养 　　不定芽增殖得到的植株表现细弱,为了让其生根,本研究在不添加任何生长调节剂的MS培养基进行壮苗培养。大约20d后,选择生长健壮的植株,在1/2MS培养基上诱导其生根,每个处理30瓶,每瓶一个单株,重复3次。30d后观察统计生根率及试管苗生长情况。具体处理见表3,图3,图4。 　　图3 生根培养 　　图4 含活性炭的生根培养 　　2.3 试验结果评测指标 　　出愈率(%)=诱导出愈伤组织的外植体数/接种的外植体总数×100%;分化率(%)=已分化的愈伤组织个数/接种的愈伤组织总数×100%;生根率(%)=生根的外植体数/接种的外植体总数×100%。 　　3 结果与分析 　　3.1 叶片愈伤组织的诱导 　　3.1.1 不同生长调节剂组合对叶片愈伤组织诱导的影响 　　先将接种后的叶片置于黑暗环境进行培养,10d后取出转入光下培养。一段时间后,部分叶片有开始卷曲的迹象,随着培养时间的延长,叶缘处出现白色颗粒,此时标志出愈的开始,30d后统计结果见表4。 　　从表4极差分析可以看出,不同激素配比对“北极星”叶片愈伤组织诱导的效果是不同的。在3个因素中,对“北极星”叶片出愈率的影响由大到小的顺序为2,4-DNAA6-BA,这表明2,4-D对出愈率的影响最大,随着2,4-D浓度的升高,出愈率也呈上升趋势。通过