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野生鱼腥草黄酮类化合物清除DPPH自由基作用 　　摘要:以六盘水本地野生鱼腥草为原料,70%乙醇作为提取介质,提取野生鱼腥草黄酮类化合物。以抗坏血酸( VC)和VE为对照品,采用DPPH法研究野生鱼腥草黄酮提取物对自由基的清除作用。结果表明,野生鱼腥草黄酮提取物具有较强的抗氧化作用,在其浓度为51.644g/mL时其清除率可达62.27%,显著高于相同浓度下的VC和VE的清除率。因此,野生鱼腥草黄酮提取物可作为一种天然抗氧化剂。 　　关键词:鱼腥草;黄酮;DPPH自由基 　　 　　中图分类号:Q58 　　文献标识码:A 　　文章编号:1674-9944(2010)07-0175-03 　　 　　1 引言 　　生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学研究证明,衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系[1]。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应,造成相关细胞结构与功能的破坏,其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤,使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下,如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力,人体就会加速衰老、易患疾病。天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用,同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此,对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究,己得到普遍关注[2]。 　　鱼腥草(?Houttuynia cordata Thunb?)为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。产于我国长江流域以南各省。夏季茎叶茂盛花穗多时采收,洗净,阴干用或鲜用,名见《名医别录》。唐苏颂说:“生湿地,山谷阴处亦能蔓生,叶如荞麦而肥,茎紫赤色,江左人好生食,关中谓之 。菹菜,叶有腥气,故俗称:鱼腥草。” [3] 　　黄酮类化合物(Flavonoids)又称生物类黄酮(Bioflavonoid),一般能溶于水、稀乙醇、乙酸乙酯等极性溶剂中,难溶于乙醚、氯仿和苯。黄酮具有显著的抗氧化性能。黄酮类化合物具有消炎、改善微循环、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等生理功能,有很高的药用价值。其抗氧化作用早已被人们所重视[4,5]。 　　2 材料与方法 　　2.1 原料与试剂 　　野生鱼腥草(采自六盘水牛亡山),二苯代苦味酰自由基(DPPH)为Sigma公司产品,抗??血酸(VC),VE,芦丁(Rutin)标准品(比利时进口,北京化学试剂有限公司),无水乙醇,Tris,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠,等试剂均为市售国产分析纯。 　　2.2 仪器 　　紫外分光光度计(UV-9100,北京瑞利公司),电子天平(SartoriusBS110S,北京赛多利斯仪器系统有限公司),高速万能粉碎机(FW80型,天津泰斯特仪器有限公司)。 　　2.3 鱼腥草黄酮类化合物样品的制备[6] 　　2.3.1 鱼腥草黄酮类化合物的提取方法 　　准确称取新鲜鱼腥草(65℃烘干至恒重)1g,于烧瓶中加入30mL70%的乙醇,65℃水浴浸提1.5h,过滤,并用70%乙醇定容至50mL,得到鱼腥草黄酮提取液。 　　2.3.2 鱼腥草黄酮类化合物样品浓度测定 　　绘制标准曲线。称取在120℃干燥至恒重的芦丁标准品10mg,用70%的乙醇溶解并定容至100mL,使其浓度为100μg/mL。将芦丁溶液用70%的乙醇稀释成0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL,各取1mL于试管中,加70%的乙醇1mL,加5% NaNO2溶液0.3mL,摇匀,静置6min,然后加10% Al(NO3)3溶液0.3mL,摇匀,静置6min,最后再加4% NaOH溶液2mL,摇匀,静置15~20min后,于510nm波长处测定吸光度?A?。 　　根据标准曲线的制作方法,以浓度(?C?,μg/mL)为横坐标,吸光度(?A?,510nm)为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程: 　　?y?=0.00262?x?-0.01314,?r?=0.9992 　　鱼腥草黄酮类化合物样品含量的测定步骤:分别吸取1mL样品于10mL容量瓶中,用70%乙醇稀释到刻度。分别取1mL稀释液于试管中,加70%乙醇1mL,依次加入5% NaNO20.3mL,混匀后静置6min,加10% Al(NO3)3 0.3mL,混匀后静置6min,加4%NaOH溶液2mL,摇匀,静置10min,同时以70% 乙醇代替样品液配制空白试剂。在510nm 波长处测定吸光度。 　　2.4 鱼腥草黄酮类化合物对DPPH自由基的清除实验[7,8] 　　DPPH溶液的配制:准确称取44mgDPPH,用无水乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中,DPPH浓度为120μmo1/L,避光保存(0