新型拉曼探针的制备及其在肿瘤标志物检测中的运用.pdfVIP

II IIl lIIIII I UIllIIII 中文摘要 Y2774036 新型拉曼探针的制备及其在肿瘤标志物检测中的应用 摘要 本文结合纳米技术、DNA自组装技术及表面增强拉曼光谱(SERS)技术等， 提出了一种新型拉曼探针的制备方法，并将这种新型的拉曼探针应用于肿瘤细胞 表面双组分的同时检测，实现了对肿瘤细胞表面活性物质分布情况的成像分析研 究，同时将纳米技术结合酶循环放大技术应用于DNA甲基化酶的检测研究，本 论文主要从以下三个方面进行了阐述： 第一部分提出了基于纳米技术和DNA自组装技术制各新型拉曼探针的方 法，通过设计不同碱基序列的三种茎环DNA，通过金．硫键(Au．S)将茎环DNA 修饰到金纳米粒子的表面，从而制得纳米金生物条码。在引发链DNA存在的情 况下，通过碱基互补配对原则，引发链DNA与茎环DNA结合并将茎环DNA打 开，茎环DNA裸露出的一端又可以与另一个茎环DNA分子互补配对打开并裸 露出一段DNA链，这样就会引发一系列的茎环DNA的自组装，最终可以得到 一个具有枝状结构的纳米球，即为所需的新型的拉曼探针，通过茎环DNA分子 的自组装，可以将大量的拉曼信号分子和纳米金结合到一起，从而实现了拉曼信 号的放大。 第二部分提出了一种基于DNA一纳米金自组装技术和表面增强拉曼光谱 粘蛋白和核仁素)的一种方法并对其进行成像分析。首先制备了两种拉曼探针， 分别标记两种肿瘤标志物，为检测两种活性物质，设计了两种不同的识别探针， 具有特异性识别功能的适体不仅能够捕获肿瘤细胞，而且适体链的另一端可以与 拉曼探针结合，用Cy3修饰的拉曼探针标记MUCl粘蛋白，Rox修饰的拉曼探 针标记核仁素，利用表面增强拉曼光谱技术对两种信号分子进行检测，通过选取 两种信号分子的特征峰对两种标志物进行成像分析，可以清晰地看到两种组分在 肿瘤细胞表面的分布情况。与单一组分物质的检测相比，双组分肿瘤标志物的同 时检测能够为癌症的临床医疗诊断和其在肿瘤发展阶段的机理研究提供更多的 帮助。 第三部分提出了一种基于纳米金技术、酶循环放大技术和表面增强拉曼光谱 (SERS)技术检测DNA甲基化酶的方法，在这种方法中，通过设计茎环DNA 分子序列，DNA甲基化酶会在特定碱基识别序列的腺嘌呤上修饰上甲基，具有 相同识别位点的限制性内切酶DPnI会将其剪开，并释放出一条新的DNA链， 通过已修饰茎环DNA分子的磁性微球捕获这条新的DNA链，并结合由金纳米 粒子制备的拉曼探针，在DNA聚合酶和dNTPs的作用下实现了DNA链的循环 1 万方数据 中文摘要 利用和表面增强拉曼信号的放大，通过这种方法检测甲基化酶的检测限可达 5．0×10～U／，,L。 关键词：纳米金DNA自组装肿瘤标志物表面增强拉曼光谱(SERS) Ⅱ 万方数据 ABSTRACT PREPARATIONOF NEWRAMAN PROBES ANDTHE APPLICATIONINCANCER MARKERSDETECTION ABSTRACT