染料及药物小份子与人类端粒DNA相互作用的研究.pdfVIP

摘要 ㈣㈣栅瓣㈣一 摘要 小分子和DNA的结合模式与DNA自身的转录和复制密切相关，对它们之 间结合模式的研究能够进一步阐明DNA的结构与功能的关系，以及抗癌、抗病 毒、抗肿瘤药物的作用机理和理解某些常见疾病的发病机理等。 本论文以分析速度快、方法简便、成本低、设备简单、样品需求量少的电化 学分析方法为基础，结合光谱法详细研究了具有氧化还原性质的染料及药物小分 别，并讨论了它们之间差异性作用的模式和机理。本文结合染料及药物分子的电 化学特性以及石墨烯优良的导电性能，首次制备了茜素／石墨烯一壳聚糖 (A刚GR．CS／GC)电极及竹红菌甲素／石墨烯(HA．G剐GC)电极。与裸电极相比较， 该修饰电极能够高效、特异性结合端粒DNA分子，还具有性质稳定、电化学信 号明显等优点。利用上述修饰电极不仅对染料及药物小分子与端粒DNA的作用 机制进行了探讨，还用于了人体血样及腹液中端粒DNA含量的检测，且检测结 果令人满意。本课题研究内容和结论如下： 与端粒DNA在生理条件下的相互作用，结果表明，PCV和端粒DNA的结合模 式为嵌插模式。基于伏安滴定实验求得PCV与端粒DNA的结合常数和结合位 点数分别为5．3×10，Ⅱ10l·L。·和1．7。在最优的实验条件下，根据PcV还原峰电流 变化量与端粒DNA浓度的变化关系可以测得溶液中端粒DNA的含量，当端粒 扰性较好，为定量检测端粒DNA提供了一个简便、快速的分析方法。 舢R-CS电极，该修饰电极在pH=7．4的磷酸盐缓冲溶液中出现了一对可逆的 V，还原峰的峰电位位于一0．652 氧化还原峰，AR的氧化峰的峰电位位于．o．573 V。循环伏安法(CⅥ证明AR在电极上发生了两电子两质子的氧化还原过程，并 且标准速率常数五为1．69s～。基于AR与端粒DNA相互作用后而导致的AR还 原峰电流减弱及式量电位(E0’)负移等电化学信号的变化，建立起了一种快速灵 敏、重现性好、操作简单的测定人类端粒DNA的电化学分析方法，此方法的线 mol·L—l～1．4×10—5m01·L～，线性拟合方程为 性响应范围为8×10’8 0罐m01·L。1 (S／N=3)，该方法可对生物样品直接测定，无需添加试剂及预处理样品。有望用 摘要 于实际样品的测定。 3．将石墨烯(Graphene，GR)掺杂竹红菌甲素(HypocremnA，HA)按照一定 的体积比混合得到GR．HA混合液，运用透射电镜(rrEM)和傅里叶红外光谱(FT瓜) 对混合液进行表征，得知GR与HA的主要作用力为万一万堆积效应和氢键作用。 循环伏安法(CⅥ和示差脉冲伏安法∞PV)测量是在pH≥6．0的磷酸盐缓冲溶液中 进行。荧光实验证明了HA对EB．DNA体系能够产生荧光猝灭现象，且猝灭过 K和 程为动态猝灭。基于荧光变温实验，分别计算出了HA和端粒DNA在293 308 K时的结合位点数为1．04和O．89。在常温下，HA与DNA反应后的电子转 移系数(a)为0．64，标准速率常数(墨)为1．28×10’2s～。热力学实验证明了两者之 间的作用力主要是氢键和范德华力。当溶液中端粒DNA的浓度在 5．9l×10．9～7．27×10。7 mol·L。I的范围内，HA氧化峰电流的变化量与端粒DNA的浓 度 成 良 好 的 线 性关 系 ， 线 性 回 归 方 程 为 Hlol·L’1(S烈=3)。将该修饰电极用于人类血清和腹液中端粒DNA的测量，结果令 人满意。标准加入法测得样品的回收率为99．54％～103．2I％。 关键词：邻苯二酚紫，茜素，竹红菌甲素，端粒DNA，电分析化学，修饰电极 II Abs仃act A山刚[ract