生物功能化微纳米材料的制备与蛋白质的亲和分手.pdfVIP

SYNTHESIS OF BIOFUNCTIONALIZED MICRO/NANO MATERIALS AND THEIR APPLICATION IN AFFINITY SEPARATION OF PROTEINS A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science By Zou Xueyan Supervisor: Prof. Zhao Yanbao Prof. Li Binjie Date June, 2013 摘 要 摘 要 本文采用 SiO 、FeOOH 及 Fe O 三种微纳米材料为载体，对其表面进行生物功能 2 3 4 化，并利用它们对谷胱甘肽 S-转移酶（GST ）及六聚组氨酸为标签的 （His-tagged ）蛋 白进行分离、纯化，采用多种现代分析手段对所得样品的形貌、结构及性能进行了表征， 并对其亲和分离蛋白质的能力进行了研究。本论文的主要研究内容及结论如下： （1）纳米 SiO2 的制备和生物功能化及其在 GST 分离中的应用 通过正硅酸乙酯 （TEOS ）的水解制备了三种不同形貌的纳米 SiO2 （哑铃形、纤维 状、链状）；考察了 TEOS 的加入方式、氨水浓度及TEOS 浓度对样品形貌的影响，并 分析了其形成机理。进而以球形纳米 SiO2 为载体，通过对其表面进行氨基化、醛基化 及生物功能化，制备了对 GST 具有特异性吸附的 SiO -GSH 纳米微球；采用扫描电子 2 显微镜（SEM）、紫外可见分光光度计 （UV-Vis ）、热重分析仪（TG ）、十二烷基磺酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS）分析测定了 SiO -GSH 纳米微球的形貌、结构及分 2 离蛋白质的能力。结果表明，SiO -GSH 微球可用于 GST 的初步分离与纯化。 2 （2 ）巯基 SiO 纳米微球的制备及其在 GST 分离中的应用 2 采用巯基丙基三甲氧基硅烷 （MPS ）一步水解法制备了表面带有巯基 （―SH ）的 SiO 纳米微球 （nSiO -SH ），探讨了水醇比、反应温度、MPS 初始浓度及反应时间对 2 2 nSiO -SH 形貌的影响，并分析了反应机理；采用二硫代二硝基苯甲酸法 （DTNB 法）和 2 X-射线光电子能谱仪 （XPS ）定量检测了微球表面的―SH 含量，发现微球表面的―SH 含量与反应条件密切相关。进而利用 nSiO -SH 微球与还原型谷胱甘肽 （GSH ）中的― 2 SH 反应生成双硫键 （―S―S―），在nSiO -SH 微球表面键合 GSH 分子，得到生物功能 2 化的纳米 SiO 微球 （nSiO -GSH ）；利用 SEM、TEM、FT-IR 分析了 nSiO -GSH 微球的