头孢吡肟对医院分离的革兰阴性杆菌的体外抗菌活性的四种方法学评价_论文.docxVIP

头孢吡肟对医院分离的革兰阴性杆菌的体外抗菌活性的四种方法学评价 作者：康梅　 刘志华　谢轶　过孝静　郑沁　陈慧莉　　陈知行　程曦　曾蔚　贾文祥 【关键词】 头孢吡肟 头孢吡肟（cefepime）是第四代头孢菌素的代表药物，对大多数革兰阳性和阴性菌，对肠杆菌属、克雷伯菌、奇异变形菌、铜绿假单胞菌、金葡菌等均具有较强的抗菌活性，具有广谱、低毒等特点，有良好的药动学性质 ［1］ 。国外资料显示头孢吡肟对第三代头孢菌素敏感或耐药的肠杆菌科细菌均具有较强的抗菌活性［2］ 。文献报道，头孢吡肟是策略性替换第三代头孢菌素的首选药物 ［3］ 。 目前测定头孢吡肟体外抗菌活性常用的有几种方法:用作定性的纸片扩散法和定量的稀释法（包括琼脂稀释法和肉汤稀释法），其中琼脂稀释法被作为标准参考方法，但因操作复杂费时主要用于新药体外药效学研究;商品化的自动化细菌鉴定药敏系统可进行体外抗菌活性测定，我院MICROSCAN细菌鉴定药敏系统就是采用半定量肉汤稀释法。该系统同时提供快速接种法和标准浊度法，因快速接种法操作简便、快速，应用更广。通过参加全国细菌耐药监测网，发现我院与其它医院比较，革兰阴性杆菌对头孢吡肟的体外敏感性有明显差异。此种差异可能来源于本地区细菌的特异性或我院采用MICROSCAN快速接种法的方法学差异。为分析这种差异，对我院MICROSCAN快速接种法结果准确性进行评价。本实验设计以琼脂稀释法为参考标准，观察纸片扩散法、标准浊度法及MICROSCAN快速接种法与参考方法的一致率，进行方法学的比较。 　　1材料与方法 菌种来源 四川大学华西医院临床微生物实验室2017年9月～11月送检的住院患者标本中分离得到的来源于痰、尿、血、脓液、胆汁和其它分泌物的各种革兰阴性杆菌301株，主要有ESBL阴性大肠埃希菌和克雷伯菌、阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌属和嗜麦芽寡养单胞菌等。 菌种鉴定和细菌体外药物敏感性实验 细菌鉴定按全国临床检验操作规程 ［4］ 常规操作，全部使用自动化MICROSCAN WALKAWAY40细菌鉴定药敏系统鉴定。采用琼脂稀释法、纸片扩散法、标准浊度法和MICROSCAN快速接种法对301株革兰阴性杆菌进行同期体外药敏测定。琼脂稀释法使用Bristol-Myers Squibb公司生产的头孢吡肟（批号3E77405）。纸片扩散法的药敏纸片为英国Oxoid公司的头孢吡肟（每片30μg）。标准浊度法用浊度仪调制1×108 CFU/ml的菌液，使用和仪器快速接种法相同批 次的鉴定药敏板。以上几种方法均按照美国临床实验 室标准化研究所（CLSI/NCCLS）2017年版的规定操作［5］ 。头孢吡肟快速接种法接种后，用MICROSCAN WALKAWAY40细菌鉴定药敏系统对其进行细菌鉴定和药敏测定。 　 质量控制 琼脂稀释法同时用标准菌株（铜绿假单胞菌ATCC27853）进行质控，纸片扩散法用标准菌株（大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853）进行质控，按CLSI/NCCLS（2017年）规定，将符合质控范围的同批结果列入统计。MICROSCAN快速接种法使用质量合格的鉴定药敏板，出厂前均经过校定，在本实验室每批次的鉴定药敏板均用标准菌株（大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853）进行质控，仪器的使用严格按照生产厂家的说明书操作。标准浊度法每次使用浊度仪经空白和4×10 8 CFU/ml菌液校正。 结果判读标准 按照CLSI/NCCLS（2017年）判读结果。 　2 结果 琼脂稀释法 301株临床常见革兰阴性杆菌对头孢吡肟的总敏感率为%，大肠埃希菌的敏感率为%，肺炎克雷伯菌为%，铜绿假单胞菌为%，不动杆菌为%，阴沟肠杆菌为%，嗜麦芽寡养单胞菌为%（表1）。 琼脂稀释法与其它三种方法比较 分别用琼脂稀释法、纸片扩散法、标准浊度法和MICROSCAN快速接种法测定头孢吡肟对301株革兰阴性杆菌体外敏感性。以琼脂稀释法为标准方法，其它三种方法与其结果不一致的菌株数分别为:纸片扩表1株革兰阴性杆菌对头孢吡肟的敏感率 　 琼脂稀释法与其它三种方法的统计学比较 计算三种方法与琼脂稀释法的结果符合率分别为:纸片扩散法%，标准浊度法%，MICROSCAN快速接种法%。建立χ 检验，计算三种方法与标准参考方法结果有无统计学差别（表3）。纸片扩散法和标准浊度法与参考方法结果无统计学差异，MICROSCAN快速接种法与参考方法结果有统计学差异。将三种方法与标准参考方法的符合率两两比较，结果显示，纸片扩散法和标准浊度法两者与参考方法的符合率均高于MICROSCAN快速接种