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《蜂蜜中 5 种双稠吡咯啶类生物碱的测定 《蜂蜜中5种双稠吡咯啶类生物碱的测定 高效液相色谱-质谱/质谱法》 编制说明 一、标准制定的任务来源及意义 1、任务来源 本标准是根据中华全国供销合作总社（供销厅函科字[2013]9号文）下达的 任务，名称为《蜂蜜中双稠吡咯啶类生物碱残留的测定》，计划编号为2013GH-1-017，由中华人民共和国江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心负责制定，本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。 2、制定标准的意义 （1）双稠吡咯啶生物碱广泛存在植物中并具有慢性毒性。 据统计，世界上约有3%的有花植物即6000余种植物含有双稠吡咯啶生物碱 （Pyrrolizidinealkaloids，PAs）。PAs大多数是由具有双稠吡咯啶环的氨基醇和不同的有机酸两部分缩合形成，其醇部分叫裂碱（necine），酸部分叫裂酸（necicacid）。在双稠吡咯啶环的1，2位可是双键或是他和的单键，l，2位为双键（即可形成烯丙酯结构）的PAs具有肝脏毒性，称为肝毒双稠吡咯啶生物碱（hepatotoxicpyrrlizidine,HPAs）。其中具有环状双内脂的PAs毒性最强，如倒千里光碱等。由于PAs中毒是呈慢性经过，不易引起人们的注意，且其侵害是不可逆的。 表1常见5种双稠吡咯啶类生物碱相关信息 序号中文名称英文名称CAS号单一分子量分子结构式化学结构式1倒千里光碱Retrorsine (β-Longilobine)480-54-6351.168182C18H25NO6 Monocrotaline 2野百合碱315-22-0325.152527C16H23NO63千里光菲灵碱Seneciphylline (a-Longilobine)480-81-9333.157623C18H23NO5 4千里光宁Senecionine (Integerrimine)130-01-8335.173279C18H25NO5 5克氏千里光碱senkirkine2318-18-5365.183838C19H27NO6 （2）通过食物链在动物源性食品中传递，将危害人体健康。 有文献报导，欧洲曾在瑞士阿尔卑斯山脚的蜂蜜样品中检测出PAs，主要是肝毒性的千里光菲灵的含量为30～70μg/kg，也有研究人员发现德国含有臭狗舌草花粉的蜂蜜样品中检出PAs，含量高达0.42~1.48mg/kg。除此之外由于动物误食含PAs植物等情况导致PAs随食物链进入最终的动物源性食品，如羊奶、牛奶和动物内脏中，将潜在危害人体健康。 （3）多个西方国家已制定PAs每日最大摄入量，国内大量文献报道毒性，但由于国内无标准检测方法和文献检测方法，无数据积累，未引起相关政府部门重视。 欧洲药品局2012年10月25日发布了EMA/HMPC/893108/2011号文件，在此文件中包括德国、荷兰、新西兰、澳大利亚等在内的国家规定了PAs的每日最大摄入量从0.1μg/kg/day~1μg/kg/day。 经查询中国没有任何与PAs相关的标准检测方法和文献检测方法，但国外已有较多针对PAs检测的文献方法。 基于以上3点，需要制定标准并开展检测工作，积累数据，防患未然。 二、编制依据 本标准的编制遵循GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》和SN/T0001-1995《出品商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的基本规定》的要求进行编写制订的。 三、标准制定过程 本标准起草单位在2013年2月收到中华全国供销合作总社任务下达文件后，立刻开始着手进行标准文本、编制说明和验证工作。 本标准起草人通过查询相关资料和文献，结合已有检测基础，建立了蜂蜜中双稠吡咯啶类生物碱残留的检测方法。经实验研究验证后，方法的灵敏度、特异性和选择性均能满足相应的检测要求。 四、主要试验技术论证 4.1色谱和质谱条件的优化 选择乙腈-水、乙腈-5mmol/L乙酸铵溶液、乙腈-0.1%（v/v）甲酸-5mmol/L乙酸铵溶液作为流动相分析比较5种PAs保留和峰型效果。结果表明，流动相中加入适量乙酸铵能够有助于5种PAs化合物的色谱保留，但峰型会出现略微拖尾现象。而少量甲酸的加入，五种PAs保留时间均有所提前但峰形更对称，同时正离子模式下，加入少量的酸有利于目标化合物的离子化，灵敏度可提高10~20%。分析中我们对常规碳十八