toll样受体在系统性红斑狼疮患者外周血单核源性巨噬细胞上的表达以及在其产生白介素上的作用.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文Toll样受体4在系统性红斑狼疮患者外周血单核源性巨噬细胞上的表达以及在其产生白介素6上的作用姓名：沈育娟申请学位级别：硕士专业：内科学（风湿免疫）指导教师：沈凌汛;胡中科技大学同济医学院硕士论文Toll样受体 4在系统性红斑狼疮患者外周血单核源性巨噬细胞上的表达以及在其产生白介素 6上的作用硕士研究生：沈育娟导师：摘沈凌汛胡豫教授要系统性红斑狼疮（SLE）是一种常见的自身免疫性疾病，免疫细胞的功能紊乱及免疫因子的网络失衡在狼疮的病理过程中起重要的作用。经检测 SLE患者外周血和病理组织中有多种免疫因子表达水平异常，其中白细胞介素 6（interleukin-6，IL-6）在 SLE中占有重要的一席。IL-6是一个多效的细胞因子，在免疫调节和炎症反应中具有广泛的生物学活性。可以导致 B淋巴细胞分化为抗体形成细胞，并促使 T细胞成为效应细胞。IL-6具有很多强大的促炎症效应。在狼疮鼠的模型中，阻断 IL-6可以改善各种模型鼠的病情。最近的数据表明 IL-6在 B细胞的高度活化和人类狼疮的免疫病理和组织损伤中具有重要的作用。SLE患者外周血中 IL-6自发性水平升高，其机制尚不明确。细菌，尤其是格兰氏阴性菌以及病毒感染是狼疮诱发和加重过程中的重要因素。但是，是否感染是确切的 SLE诱发因素以及感染是如何诱发 SLE患者发生免疫紊乱的，目前尚有争议。哺乳动物感知外来微生物的入侵主要是依靠模式识别受体（pattern recognized receptors,PRRs），其中最重要的 PRRs就是 Toll样受体（toll like receptors,TLRs）。Toll样受体 4（TLR4）是近年来发现的识别格兰氏阴性菌产物脂多糖（lipopolysaccbaride，LPS）的一种主要蛋白，是桥接机体天然抗感染反应及适应性免疫的一种重要的分子。本研究的目的是：1.评价人外周血单核细胞源性的巨噬细胞的 TLR4的表达情况，探讨感染和 SLE的关系。2.初步研究 TLR4在感染引起机体免疫反应中的作用和信号传导，提出在细胞水平阻断感染引起狼疮异常免疫反应的可能性，并为控制狼疮的病理提供可能的治疗靶点。实验一 TLR4介导LPS对于外周血单核细胞源性的巨噬细胞的激活目的:探讨TLR4在LPS激活巨噬细胞中的作用及信号转导途径。方法:分离正常外周血中单核细胞，体外培养成巨噬细胞，分为3组：1.培养基组。2.LPS组，细胞培养30min后加入终浓度10ng/ml的LPS培养过夜。3.培养基+ LPS+TLR4阻断剂。细胞加入终浓度分别为5μg/mL, 20μg /mL, 30μg /Ml的TLR4阻断剂孵育30min, 120min后中止反应，再加入10ng/ml的LPS培养过夜。所得细胞分别检测NF-κB的活性变化，并在上述分组细胞培养8h后收集上清液，ELISA法测IL-6浓度。结果:培养基组、LPS+培养基组、LPS+培养基+TLR4阻断剂(终浓度分别为和5μg/mL, 20μg /mL, 30μg /mL)组NF-κB相对活性分别为27.7±3.3，76.6±11.1,65.1±7.6；28.1±4.9,24.7±2.9。培养基组、LPS+培养基组、LPS+培养基+TLR4阻断剂组(终浓度分别为5μg /mL,20μg /mL, 30μg /mL)组IL-6水平: 48.08±11.2, 2234.71±63.5, 887.09±24.8,348.54±20.1, 299.43±19.9，组间两两比较差2华中科技大学同济医学院硕士论文异有显著性(P0.05或P0.01).结论:TLR4介导LPS对于外周血单核细胞源性的巨噬细胞的激活。最终激活NF-κB。TLR4的激活可以导致血清IL-6水平的升高，TLR4在感染引起IL-6的升高，并发挥其免疫效应中起关键的作用。实验二 SLE患者外周血单核细胞源性的巨噬细胞TLR4 mRNA变化及其意义目的:探讨SLE患者外周血单核细胞源性的巨噬细胞TLR4变化规律及意义，为感染与SLE发病的联系寻找进一步的理论依据。方法:选取SLE病人17例。清晨空腹抽取外周静脉血10ml，分离单个核细胞(PBMC)及进一步分离单核细胞，与上个实验相同的条件体外培养成巨噬细胞。同样分为培养基组和LPS+培养基组。RT-PCR检测细胞TLR4 mRNA的表达化；ELISA法检测培养上清液中IL-6的浓度变化。结果:与正常组比较，SLE外周血单核细胞源性的巨噬细胞TLR4的表达上调，IL-6的浓度升高（P0.05）。且在LPS的刺激下，SLE外周血单核细胞源性的巨噬细胞的TLR4 mRNA和IL-6也均升高。结论: SLE外周血单核细胞源性的巨噬细胞的TLR4介导SLE