CSF脑脊液电泳+等电聚焦介绍.ppt

脑脊液蛋白研究 脑脊液简介 CSF是存在于脑室及蛛网膜下隙内的一种无色透明液体，CSF中的蛋白质80％以上通过超滤作用来自于血浆。 CSF蛋白电泳呈现前清蛋白含量异常增高时，多见于脑积水、脑外伤、脑萎缩及中枢神经系统退行性变等疾病。含量下降见于脑内炎性疾病。 CSF免疫电泳可提示血脑屏障渗透性改变的严重程度 例如：γ-球蛋白增高，常见于脱髓鞘性疾病（多发性硬化及麻痹性痴呆） Blood brain barrier (BBB)作用 脉络丛上皮细胞对各种物质的选择性： ★ 最易通过物质： 氯、钠、镁离子及乙醇 ★ 不易通过物质： 清蛋白、葡萄糖、钙离子 、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐 ★ 不能通过： 纤维蛋白、补体、抗体、某些药物、胆红素、胆固醇 病理性脑脊液蛋白的产生机制 渗透 鞘内合成 两种机制并存 脑脊液蛋白研究方法的原则 鉴别出渗透或鞘内合成 蛋白质组份变化的定性检测 中枢合成免疫球蛋白是中枢神经系统疾患的一个重要信号，主要用于对中枢神经系统疾患进行诊断和鉴别诊断。 如：多发性硬化症、痴呆、脊髓炎、副肿瘤性脑炎、神经性梅毒等。 现阶段临床上诊断中枢神经系统病变主要依靠影像学结合临床分析，但是，在病变早期影像学及常规检查常无法诊断。 然而中枢神经系统病变患者脑脊液中免疫球蛋白IgG增加却发生较早。 因此实验中对脑脊液中IgG进行蛋白电泳，形成的典型寡克隆区带对上述疾病的早期诊断而言，是重要的、必不可少的依据。 同时进行脑脊液IgG 24小时合成率及寡克隆区带分析，对神经系统免疫疾病的诊断及疗效监测均具有重要的临床意义。 脑脊液的总蛋白定量 方法 比浊法 比色法 (Lowry, Coomassie blue/SDS, pyrogallol red/SDS) 蛋白定量 不能鉴别 脑脊液蛋白的来源 蛋白定量 不能检测出异常的寡克隆 免疫球蛋白 操作规则 同一患者的血清与脑脊液标本必须要同一时间采集. 同一患者的血清与脑脊液标本必须要在相邻位置进行电泳检测分析. 同一患者血清中的待分析免疫球蛋白必须与脑脊液中的免疫球蛋白含量相同：即需要将血清和脑脊液中的免疫球蛋白含量稀释至相同浓度. 利用高分辨技术在琼脂糖凝胶上对脑脊液蛋白进行电泳分离(血清中的免疫球蛋白的浓度应该被稀释到和脑脊液中Ig一样的浓度: 5 至 10 mg/L). 利用与标有过氧化氢酶的特异的抗血清(G, A, M, k, l)之间的免疫反应,免疫球蛋白将会被固定在Igs. 过氧化氢酶被激活从而进行显色 : 这种显色反应非常灵敏 (最低可以检测到125-250 μg/L的微量蛋白). Hydragel 6 CSF Hydragel 6 CSF : 检测结果分析说明 脑脊液和血清标本必须同时进行监测分析. 只有在脑脊液和血清电泳对照出现区别时才能对结果进行解释说明. HYDRAGEL 6 CSF试剂盒适用于对神性系统疾病的检测分析; 这一检测结果在任何情况下都不能以电泳结果作为唯一的依据. 1 : 肌肉萎缩 (0.52) 2 : 痴呆症 (0.37) 3 : Syndrome paranéoplasique de l’Homme Raide (0.57) 4 : 多发性硬化症 (1.10) 5 : 多发性硬化症 (2.08) 6 : 病毒性脑膜炎 (0.84) 几个反应血脑屏障状态的指标 白蛋白指数： 白蛋白CSF/白蛋白血清 ＜9 无损害，9-14，有轻度损害 ， 15-30中度损害 ，31-100，严重损害指数＞100，表明屏障完全崩溃 脑脊液中IgG和白蛋白比率：70％多发性硬化病例比率＞0.27 IgG/白蛋白指数=（IgGCSF/IgGSerum）/(白蛋白CSF/白蛋白Serum), 指数参考范围：0.30-0.77，指数＞0.77，证明鞘内IgG合成增加，90％以上多发性硬化病例指数＞0.77 几个反应血脑屏障状态的指标 Tourtelotte指数：ISI（mg/24h）=〔IgGCSF-(IgGSerum/369) 〕-〔(白蛋白CSF-(白蛋白Serum/ 230)* (IgGSerum/白蛋白Serum)*0.215〕 Reiber指数：ISI（mg/L）=〔IgGCSF-{0.8*〔(白蛋白CSF /白蛋白Serum )2+15.10-6〕0.5-18.10-4}* IgGSerum Schuller指数：ISI（mg/L）= IgGCSF-{30+〔(白蛋白CSF-240)/60〕* IgGSerum 当Tourtelotte指数大于3.5 mg/24h ，或者Reiber指数和Schuller指数为零时