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连翘叶茶提取物抑菌活性研究 　　【摘要】目的 研究连翘叶茶提取物的抑菌活性。方法 以金色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌为代表菌种，用K-B纸片扩散法对连翘叶茶提取物的抑菌活性进行初步研究。结果 连翘叶不同提取物对供试菌均有一定的抑菌活性，其中乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有较强的抑菌活性。提取物对金色葡萄球菌的抑菌活性与提取物浓度成正比，对大肠杆菌和白色念球菌的抑菌活性与提取物浓度不成正比关系。结论连翘叶不同提取物对金色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念球菌均有抑制作用。 　　【关键词】连翘叶；提取物；抑菌活性 　　 　　连翘为木犀科(Oleaceae)连翘属(Forsythia)植物连翘(Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果实。连翘药材商品分为“青翘”和“老翘”，果实初熟尚带绿色时采收称为青翘，果实熟透颜色发黄时采收称为老翘[1]。连翘是中国临床常用传统中药之一，以果实入药，连翘叶近年来制成珠茶作为滋补调理饮料发展较快，但目前对于连翘叶的研究多集中所含化学成分的研究[2]、保肝作用及其抗氧化作用[3-5]的研究。因此，我们研究连翘叶茶的抗菌作用，为其作为药材或保健品开发利用提供依据。 　　1 器材 　　1.1 药材 　　连翘叶2010年4月采自山西省安泽县连翘GAP生产基地，植物标本由山西省药检所郭文菊研究员鉴定，植物标本现存于山西中医学院实验中心。 　　1.2 试剂与菌株 　　金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherchia coli)、白色念珠菌(Candida albicans)，均由山西省药品检验所提供。营养琼脂培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司；牛肉膏购自北京市海淀区微生物培养基制品厂，蛋白胨购自北京奥特博星生物技术有限责任公司，庆大霉素细菌药敏试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司，所用试剂均为分析纯。 　　1.3 仪器与设备 　　仪器：LR4001型旋转蒸发仪（德国Heidolph公司）；CA-111型冷却水循环系统（上海爱郎仪器有限公司）；SHB-88型水循环真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHP-9162型电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；BBS-DSC型洁净工作台(上海巴艾贝斯科技有限公司)；BS224S-L型电子分析天平（德国Sartorius公司）。 　　2 方法 　　2.1连翘叶提取物的制备 　　取连翘叶300 g，粉碎，用95%乙醇加热至75 ℃回流提取3次，每次1小时，减压浓缩回收溶剂至无醇味，得总提取物35 g。总提取物经水悬浮后，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，得到的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取相及萃取后水相提取。取适量各部位浸膏及总浸膏，干燥成粉末，备用。 　　2.2 抑菌活性分析 　　2.2.1药敏纸片的制备[5] 　　将普通定性滤纸用打孔机打成直径为6 mm的圆形纸片，经121 ℃，20 min高压灭菌，干燥。分别取干燥后的不同待试样品0.5, 1.0, 2.0 mg，用合适的溶剂溶解，将滤纸片放入溶液中，反复吸取、晾干，直至将溶液吸干，备用。 　　2.2.2 培养基的制备 　　固体培养基：用天平准确称取36 g营养琼脂，加入蒸馏水1000 ml，加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解。然后放入压力蒸汽灭菌器中经121 ℃、20 min高压灭菌，取出趁热倒入经过高压灭菌的培养皿中，厚度约3～5 mm , 冷却凝固后备用。 　　液体培养基[6]：用天平准确称取牛肉膏0.3 g，蛋白胨1 g，氯化钠0.5 g，加入蒸馏水100 ml，加热并不断搅拌，用1 % NaOH溶液调节pH 7.2～7.4，然后放入压力蒸汽灭菌器中经121 ℃、20 min高压灭菌，分装于试管中，备用。 　　2.2.3菌悬液的制备 　　用接种环分别取各菌种一环，接种于液体培养基中，放入37 ℃培养箱中培养24 h，用灭菌生理盐水分别稀释至1×10-5 CFU/ml浓度，备用。 　　2.2.4药物抑菌作用测定 　　采用K-B纸片扩散法[6-7]，用无菌移液管吸取稀释好的菌悬液0.1 mL，置于培养基中央，用涂布棒涂布均匀。用无菌镊子夹取含药滤纸片贴在培养基表面，以含药量为10 μg的庆大霉素细菌药敏试纸为阳性对照。37 ℃培养24 h后，观察并测量抑菌圈直径, 结果以mm表示。每种不同含药量的样品对3种菌均做3组平行对照，结果取平均值。 　　3 结果与分析 　　3.1连翘叶提取物的抑菌作用比较 　　连翘叶不同提取物，以细菌大肠杆菌、金色葡萄球菌和霉菌白色念珠菌作为指示菌进行抑菌实验，结果见表1，2和3。 　　表1