微生物实验课件全部PPT.ppt

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查;二、基本原理 ;三、实验器材;2．实验室细菌检查 　（1）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。 　;（b）取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅰ-2），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（图Ⅰ-2）。放回棉塞（或试管帽）（图Ⅰ-2），并将空试管放在试管架上。 ; （e）接种 按图Ⅰ-2在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下）（图Ⅰ-2），立即闭合皿盖。并按图Ⅰ-2将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。; （f）划线 另取接种环在火焰上灭菌，如图Ⅱ-4，先将环端烧热（图Ⅱ-4，1），然后将接种环提起垂直放在火焰上（图Ⅱ-4，2），以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此很快地来回通过火焰数次（图Ⅱ-4，3）。　;; 闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷。接种环 通过前面划的线条再在琼脂的另一半，按图Ⅱ-3，D从上向下来回划线至1／2处。 　 烧灼接种环，转动平板，按图Ⅱ-3，E，划最后1／4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。 　 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。; 3．人体细菌的检查 　（1）手指（洗手前与洗手后） （a）分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的）。 　（b）移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。 　（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。;（2）头发 在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。 （3）咳嗽 将去盖琼脂平板放在离口约6～8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。;（4）鼻腔 （a）按照实验台检查法的步骤（b）和（c），取出棉签，并将其弄湿。 （b）用湿棉签在鼻腔内滚动数次。 （c）按实验台检查法的步骤（e）和（f），接种与划线，然后盖上皿盖。 ;5．结果记录方法 （1）菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数1/4面积的菌落数。 （2）根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。;菌落特征描写方法如下： 　　（a）大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。 　　（b）颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。 　　（c）干湿情况 干燥、湿润、粘稠。 　　（d）形态 圆形、不规则等。 （e）高度扁平、隆起、凹下。 　　（f）透明程度 透明、半透明、不透明。 　　（g）边缘 整齐、不整齐。 ;五、实验报告;菌落观察;六、思考题;实验二 细菌形态观察和染色实验;二、基本原理;三、器材;涂片 涂成薄膜 干燥 自然干燥 固定 通过火焰2～3次 结晶紫初染 1-2min 碘液媒染 1min 乙醇脱色 至流出的乙醇无紫色 番红复染 2min 油镜镜检观察。; 1 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态； 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般20～30S。;五、实验报告 ;六、思考题;实验三 细菌的特殊染色技术;二、基本原理;荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。;三、器材;四、操作步骤;（2）荚膜的湿墨水染色法;注意：;芽孢;五、实验报告;六