核酸理化性质 四川理工学院PPT课件.ppt

（二）DNA的制备 ①辛醇－氯仿法 Et-OH DNA（水相） DNA↓ 核蛋白溶液＋辛醇－氯仿 Pro （水与氯仿相之间） ② SDS法 SDS将Pro变性，与DNA分离 ③ 苯酚法 苯酚将Pro变性，抑制Nuclease活性。活性DNA在水相 ↓ （三）RNA的制备 ① 粗提方法：苯酚法；稀碱或盐溶液（与pI联合使用）。 提取不同RNA时，先用离心法分离细胞器，再提取相应的RNA。 如rRNA从核糖体中提取，tRNA从细胞质中提取，mRNA从多聚核糖体中提取。 ② 精制方法：分子筛层析，密度梯度离心，DEAE-Sephadex，Poly dT 亲和柱(精制mRNA，与mRNA尾巴Poly A特异结合)等。 4.6 NA的分析测定和研究方法 一、NA及其组分含量的测定 （一）紫外吸收法（朗白－比尔定律） 纯NA，DNA(1μg/ml) = 0.020A260nm RNA(1μg/ml) = 0.022～0.024A260nm 即一个A值＝50μg/ml 双螺旋DNA 一个A值＝40μg/ml RNA或单链DNA （二）定糖法 RNA＋H+ ＋3，5－二羟基甲苯（苔黑酚，地衣酚） 绿色产物（A670nm） DNA+ H+ ＋二苯胺 蓝色产物（A600nm） （三）定磷法（RNA和DNA总量） 4.4 核酸和核苷酸的性质 (Section 4 Properties of Nucleic acid and Nucleotide) 一、溶解性（Solubility） ① RNA、Nt、Ns和Base纯品为白色粉末或结晶体。 ② DNA为纤维状固体。 ③ 核酸为极性物质，核苷酸和核苷可溶于水。 ④ 核酸大多与蛋白质结合成和蛋白。在不同的盐浓度下，DNA蛋白（DNP）和RNA蛋白（RNP）溶解度不同。 核蛋白 + 1mol/L NaCI→ DNP溶解 + RNP ↓ 核蛋白 + 0.14 1mol/L NaCI → DNP ↓ + RNP溶解 (低盐DNP不溶，高盐RNP不溶) 核蛋白 在pH4.2（pH = pI）时，DNP ↓，RNP溶解 核蛋白 在pH2～2.5 （pH = pI）时， RNP ↓ ，DNP溶解 二、核酸及其组分的两性性质 1. 碱基解离，第一位都在N上, 解离位点： A：在N1解离， G：在N7解离， U：在N3解离， T：在N3解离， C：在N3解离， 2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK 在12 以上） 3. 核苷酸（Nt）解离 Pi有两次解离，pK′＝0.7～1.6 pK′＝6.1～6.5 Nt含碱基和Pi，为两性电解质，当正、负解离速度相等时，该pH即为pI，（U、T除外,不带电荷） pI = (pK′+ pK′) / 2，pK′为Pi第一解离，pK′为 N解离 eg. AMP pI = (0.9+3.8) / 2 = 2.35 了解Nt的解离及pI ，在制备及分析中极有帮助。 IP α2 IP IP α2 IIP 2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK