植物离体无性繁殖和脱病毒技术PPT课件.ppt

* 第四章 植物离体无性繁殖和脱病毒技术 第二节 植物脱病毒技术 要点概述 理解：脱毒苗的意义； 了解：1、病毒在植物体内的分布及危害。 2、植物脱毒苗的鉴定、保存、 应用与繁殖。 掌握：1、无病毒苗概念； 2、植物脱毒的原理和方法。。 无病毒苗 是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。 病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。 潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。 国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。 一.病毒在植物体内的分布、传播及危害 1.分布 在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。 老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高 根尖、茎尖生长点约0.1~1mm区域内，几乎不含病毒。 (原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。) 2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制； 3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增殖 。 （二）植物脱病毒方法 物理方法 化学方法 生物方法 高温处理 茎尖培养 微体嫁接 珠心培养 愈伤脱毒 热处理脱毒 1.热处理脱毒法 热处理脱毒原理: 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起复制。 热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂，使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。 热处理的方法： （1）温汤浸渍处理 （2）热空气处理脱毒法 试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。 生长室温度35-40℃ 光照3000—10000 lx 热处理的优缺点 优点: 方法简单，效果明显。 缺点: 1)具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失 3）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 生物学方法 包括茎尖分生组织培养、微型嫁接、愈伤组织诱导、珠心组织培养。 1、茎尖分生组织培养 1）原理及依据 病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少 病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争 2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 茎尖培养 1）茎尖大小：一般以带1-2片叶原基为好，大小为0.2-0.3毫米为宜，超过0.5毫米时，脱毒效果差。（外植体过小茎尖存活率低） 2）培养基：能使茎尖快速生长、分化的培养基均适于脱毒。 3）前处理：切取茎尖之前，植物材料如经过预处理，如热水或热空气处理、低温处理、药物处理，均可大大提高脱毒效率。 4）培养条件：同一般茎尖培养 5）外植体生理状态：由活跃生长的芽上切取 优缺点： 茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好，但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。 2、微型嫁接 应用微型嫁接的原因： 木本植物茎尖培养难以生根形成植株。 具体做法： 将极小的茎尖（0.14mm~1.0mm）作为接穗嫁接到不带病毒的种子实生苗砧木上，然后将砧木、接穗一起在培养基上培养。 优点：接穗在砧木上易成活，故可用很小的茎尖来培养，去除病毒几率大，获得无病毒苗的可能性大。 微嫁接要求的剥离技术高，嫁接成活率与接穗大小呈正相关，而脱毒率与接穗大小呈负相关 脱除病毒的关键： ①要求剥离技术很高 ②需要考虑砧木和接穗对营养组成的不同要求； ③与接穗的取材季节有密切关系（苹果4~6月取材嫁接成活率较高。） 3、愈伤组织培养脱毒法 （1）原理及依据