全氟辛烷磺酸对大鼠海马神经细胞内钙离浓度的影响.ppt

全氟辛烷磺酸对大鼠海马神经细胞内钙离子浓度的影响 中国医科大学公共卫生学院 卫生毒理学教研室 刘冰* 金一和 于麒麟 王静 翟成 董光辉 丁梅 PFOS在自然环境和生物体内具不分解性和高蓄积性； 环境调查结果表明：全球范围内各类水体以及包括北极在内的所有野生动物血液中都存在PFOS污染； 人群调查资料显示：全球范围内各国家人体血液中均检测出较高水平的PFOS污染； 毒理学实验证实了PFOS对实验动物具有发育毒性、免疫毒性、生殖毒性和潜在致癌性。 引起许多国家环境学家和毒理学家的关注； PFOS 神 经 毒 性 本研究小组在前期研究中发现，PFOS染毒大鼠容易发生惊厥现象和中枢神经系统中谷氨酸(Glu)浓度升高以及中枢神经系统的病理性改变 。 Glu含量升高，激活N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体介导的Ca2+通道,促进突触后电位去极化作用开通Na+、K+依赖性Ca2+通道，引起NMDA受体介导的海马辐射层神经通路刺激的点燃效应，引起γ-氨基丁酸(GABA)能神经元突触后电位敏感性降低，减少突触后膜对兴奋性氨基酸的抑制作用，加剧钙离子内流，引起细胞内Ca2+超载，最终产生神经毒性 。 实 验 目 的 实 验 设 计 结 论 1. PFOS使大鼠海马神经细胞[Ca2+]i增高。 2.有关PFOS引起中枢神经系统内谷氨酸含量增加的机理、对钙离子通道和其他神经递质释放的影响有待于今后的研究证明。 * * 是全氟碳化物（Perfluorinate compounds，PFCs）中的重要化合物之一 。 广泛应用于纸制品、杀虫剂、涂料和洗涤剂等民用和工业产品生产领域 。 O- Perfluorooctane sulfonate PFOS C8F17SO3- 生态系统中PFOS 环境污染及其毒性 阐明全氟辛烷磺酸 (PFOS) 低剂量长期经口染毒对大鼠海马细胞内钙离子浓度 ([Ca2+]i)的影响 Wistar大鼠 对照组给予2%Tween80饲料 实验组PFOS染毒剂量分别为2、8、32、128mg/kg·feed。自由进食水,连续染毒90天。 用Fura-2/AM荧光探针法测定大鼠海马细胞[Ca2+]i的浓度。 [Ca2+]i 测 定 方 法 大 鼠 调整细胞浓度至1×106个/ml 戊巴比妥钠麻醉 剥离海马,剪碎 0.25%(W/V)胰蛋白酶37℃恒温水浴消化 200目筛网滤过 800r/min离心 2.0ml细胞悬液中加入5.0μl 2μmol/L的Fura-2/AM和3.0μl 0.05%(v/v)的Pluronic-F127，振荡恒温水浴(37℃)45 min 1000r/min离心5min Hepes-Hank’s清洗细胞 D-Hank’s液定容细胞悬液至1.0mL 室温放置20 min Hepes-Hank’s 液重悬细胞至2ml 以激发光波长340 nm和380 nm，发射光波长510 nm测定荧光强度比值(R) 加入破膜剂10%(v/v)Triton X-100 3.0μL测定最大荧光比值(Rmax) 待曲线平稳后加入螯合剂0.3mol/L EDTA 17.0μL测定最小荧光比值(Rmin) 测 定 条 件 测定设备： 日立F-4500荧光双波长分光光度计 测定步骤： 测定结果： 实际钙离子浓度计算由日立F-4500钙定量测定系统自动求出 海马细胞Fura-2/AM负载照片 注：箭头所指为Fura-2/AM与细胞内游离钙离子结合细胞 注：箭头（ ）表示加入相应试剂时间点 海马细胞细胞内钙离子浓度测定图谱 Triton X-100 EDTA PFOS剂量和[Ca2 +]i剂量效应关系 600 141.30 222.27 244.29 381.69 528.27 0 150 300 450 0 2 8 32 128 PFOS Dose(mg/kg?feed) [Ca 2 + ]i(nmol/L) [Ca2+]i(nmol/L)=214.533+2.618PFOS(mg/kg·feed) (r=0.929,P0.05) P0.05 P0.01