医学细胞生物学设计型实验2PPT.ppt

医学细胞生物学设计型实验细胞核的分离和鉴定 组员： 实验原理 细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内其沉降速度也不同，所以利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微细胞核糖体和大分子。 细胞核的比重和大小与其他组分不同，可将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质用特定的离心、分离，然后进一步分析鉴定。 匀浆：是指在低温下，将组织块放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。 甲苯胺蓝：碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，可使细胞核呈蓝色。 操作流程 断头处死小白鼠，手提尾部使腹内血液尽量流出 匀浆、过滤 离心；2500r/min离心15min 取材 迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中洗涤，称取约1g的肝组织放入烧杯 加入8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液与烧杯中，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，匀浆。 用8层纱布过滤匀浆液与离心管中。 涂片 染色 洗涤 镜检 取上清液制一张（标记1）。将原离心管中剩余上清液吹打沉淀成悬液，另制一张涂片（标记2） 分别在涂片1、2上滴加甲苯胺蓝染液，染色5～7min（即滴染） 冲去染液，吹干 预期结果 低倍镜下找到标本，再换高倍镜。可见杆细胞核已经游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有多个深蓝色的核仁。 实验试剂表 名称 规格 用量 说明   小白鼠肝脏    1g     生理盐水         蔗糖-氯化钙溶液 0.25mol/L蔗糖 0.003mol/L氯化钙溶液     甲苯胺蓝染液 1％     注意事项 开腹取出肝后要用生理盐水反复冲洗，避免血细胞对实验的影响。 尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。 匀浆置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，及时离心，防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响离心分层效果。 染色后洗涤时间不宜过长，水流不宜过大，以免影响观察效果。 实验思考 1. 为什么要用肝组织？相对于鸡血细胞有何优点？ 2. 可否使用固绿染色法代替甲苯胺蓝染液？ goodbye