网织红细胞检测课件.ppt

网织红细胞检测技术 及临床应用 概 念 网织红细胞（reticulocyte,Ret或Reti） 界于晚幼红细胞和成熟红细胞之间的过渡阶段细胞。因其胞质中残存的核糖核酸经碱性染料活体染色后，呈现点状或线网状结构，故名网织红细胞。 各种网织红细胞 网织红细胞检测技术 网织红细胞计数方法 活体染色手工镜检 血液自动分析仪法 流式细胞术检测法 手工镜检法 原理 活体染料的碱性着色基团（带正电荷）可与网织红细胞RNA的磷酸基（带负电荷）结合，使RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，形成有色的点状、线状甚至 连缀成网状结构，而血红蛋白着色相对较淡。借此在光镜下与成熟红细胞相区别。 操作方法 ①取干净试管一只，加入10g/L煌焦油蓝溶液2~3滴，然后加入等量的血液混匀后放置15~20min，使红细胞充分染色； ②取少许染色好的血液，在洁净载玻片上推成薄而均匀的血膜，干燥后用瑞氏染液复染(也可不复染）； ③在显微镜低倍镜下选择细胞分布均匀着色清晰的部位，用油镜在血片上计数至少1000个红细胞分布区域内的网织红细胞再除以1000计算出网织红细胞的百分率。同时进行红细胞计数，可计算网织红细胞的绝对值。 活体染色图 常用仪器检测 ADVIA120仪器 对Retc可提供6个参数，包括网织红细胞总数（Retic#）、网织红细胞百分比（Retic%）、网织红细胞平均体积（MCVr）、单个网织红细胞平均血红蛋白浓度（CHCMr）、网织红细胞分布宽度（RDWr）、单个网织红细胞血红蛋白含量（CHr）等 其中意义最大的除了总数，百分比以外，最重要的网织红细胞血红蛋白含量（CHr）参数。最大的优点之一是随时可计数Retic,十分便利，而且计数的细胞多，故很准确。 检测仪器 根据网织红细胞发射荧光强弱来判别区分网织红细胞成熟程度，不同成熟阶段的网织红细胞含有不同量的RNA，从而根据荧光强度而获得低、中、高荧光强度网织红细胞群。 检测技术 流式细胞术（flow cytometry） 原理 RNA经碱性荧光染料处理后，根据荧光强度反映细胞内RNA含量，可将Reti分为高荧光强度网织红细胞（HFR）、中等荧光强度网织红细胞（MFR）和低荧光强度网织红细胞（LFR）三部分。 利用上述三个指标可计算网织红细胞的成熟指数（reticulocyte materation index,RMI）。RMI对评价骨髓移植后造血功能恢复情况和EPO的疗效，以及监护放、化疗对骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。 方法学评价 手工镜检法的优点是便捷、成本低。目前仍为临床实验室的常规检验方法。但致命的缺点是影响因素多、重复性差，CV≥20%，以低Reti的标本尤为明显。 即使进行绝对值计算，也因Reti计数不准确、某些贫血网织红细胞提前释放而失去其可靠性。这些不足严重影响了该指标的临床应用。须加强质量控制，必要时对计数结果加以校正。 方法学评价 自动化仪器在许多方面具有标准化程序，试剂稳定、反应时间一致，计数细胞量大、具有质控和校准能力，因此在精密度和准确度上明显优于显微镜计数法。 但仪器价格比较偏高，试剂成本和质控成本大，影响到基层医院、小型实验室的使用期望及推广。 临床应用部分 临床参考范围 目前临床上网织红细胞的参考范围为 成人：0.8%~2.0% , 绝对值（25~75） * 109/L 新生儿：2.0%~6.0% 网红的总数或百分比对贫血的临床诊断及疗效观察非常有价值，是血液最常做的项目之一。 临床意义 网织红细胞不仅仅是个计数参数问题，更有许多新的参数被引入临床应用、科研和基础研究。 网织红细胞的增加或减少直接反映了骨髓红细胞的生成能力，主要用于对红细胞减少性疾病、溶血性贫血、治疗监测或骨髓移植后骨髓造血功能的恢复、监测放疗和化疗对骨髓造血功能的影响评估等方面。 网织红细胞增高 提示骨髓造血功能旺盛　见于各种增生性贫血如缺铁性贫血、巨幼细胞性 (缺乏叶酸、维生素B12) 贫血、失血性贫血,尤以 溶血性贫血时增加最为显著,常>10%。 缺铁性贫血及巨幼细胞性贫血在给予铁剂、维生素B12、叶酸治疗之后,可见网织红细胞明显增加。 　 小细胞贫血 单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hyp）即M/H对缺铁性贫血是很好的指标。 缺铁性贫血 正细胞贫血 网织红细胞减低 提示骨髓造血功能低下, 常见于 再生障碍性贫血。 绝对值低于5×109/L可做为急性再生障碍性 贫血的辅助诊断指标。此外，还可见于骨髓浸润性贫血如急性白血病等。 大细胞贫血 网织红细胞反应 缺铁性贫血或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗2-3d