07 生化技术tanPPT.ppt

（三）总RNA 1、破碎细胞：胍、酚等变性剂，注意缩短组织匀浆时间 2、除核蛋白：低盐、离心 3、除少量DNA：不含RNase的 DNase 4、除多糖：12000rpm以上离心 5、除盐等小分子：乙醇沉淀 6、进一步纯化，除痕量蛋白等杂质：蛋白酶K、酚氯仿抽提、柱层析 注意： 防RNaseRNasin，专一抑制剂（蛋白） DEPC处理水、浸泡 /1200C消毒，1800C烤 器皿胍盐中储存 氧钒核苷复合物（较难除去） 紫外分光法原理： 在260nm下，核酸（DNA、RNA）有最大吸收，这是由它们含有的嘌呤环和嘧啶环的共扼双键系统的特性所决定的。通常每毫升1微克的DNA钠盐溶液的光密度为0.020，每毫升1微克的RNA钠盐溶液的光密度为0.025，所以核酸浓度与光密度值有以下关系： dsDNA（ug/ml）= OD260 * 50 ssDNA（ug/ml）= OD260 * 37 RNA（ug/ml） = OD260 * 40 OD260、/ OD280 在1 .8~2.2内核酸样品比较纯。 总量定量 、鉴别方法