微生物与免疫学试验六七年制.pptx

要求讲解：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌示教平板：SS平板（肠道致病均和非致病均各一个）、双糖铁培养基（大肠、痢疾、伤寒、变形）、炭疽卷发样菌落；其它示教：小生化反应（大肠、痢疾、伤寒、变形）操作：肥达反应（注意标签贴试管上，不要贴到架子上）录像：肠道杆菌操作：肥达反应（试管凝集反应）器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原待检：病人血清（1：10稀释）倍比稀释法 1 2 3 4 5 6生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5血清0.5（吹打） 0.5 0.5 0.5 0.50.5（弃）菌液 0.5ml/管 ，从第6 1管加，振匀水浴43度，2h最终血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照稀释度凝集强弱效价*吸管 桶，试管 锅, 标签贴在试管上。结果判断以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价O 达到1：80，H达到1：160 H甲（PA）或H乙（PB）达到1：80或以上有诊断意义结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。 第6管 均匀混浊 ＋ 少量凝集 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块类别 凝集效价 意义O、H 正常值 感染可能性大O、H 低 感染可能性小 O 不高预防接种或非特异性回忆反应 H 高 O 高感染早期或交叉反应 H 不高肠道杆菌的鉴定大肠杆菌伤寒杆菌痢疾杆菌变形杆菌SS培养基胆盐枸橼酸盐煌绿乳糖蛋白胨中性红抑制杂菌生长被非致病菌分解产酸被致病菌分解产碱酸：红 碱：黄Shigella-Salmonella medium菌落红色——乳糖发酵阳性，非致病菌菌落无色——乳糖发酵阴性， 致病菌双糖铁培养基葡萄糖半固体酚红乳糖硫酸亚铁下层上层生化反应表葡乳麦甘蔗H2S尿素靛大肠---痢疾------伤寒--/+--变形-----霍乱弧菌炭疽杆菌致病菌中最大的G＋粗大杆菌 ,两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央炭疽杆菌培养基●培养: 30~35℃，在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察边缘呈卷发状 厌氧菌1、破伤风：G＋；芽胞位于菌体顶端，大于菌体， 使细菌呈鼓槌状；菌体细长，有周身鞭毛厌氧血平板上的羽毛状菌落庖肉培养基成分　牛肉浸液　　　　　　　1000mL　蛋白胨　　　　　　　　30g　酵母膏　　　　　　　　5g　磷酸二氢钠　　　　　　5g　葡萄糖　　　　　　　　3g　可溶性淀粉　　　　　　2g　碎肉渣适量　pH7.8制法　1　称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。　2　碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm×150mm试管约2～3cm高，每管加入还原铁粉0.1～0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4cm。121℃高压灭菌15min。庖肉培养基破伤风梭菌培养基破伤风痉挛2、产气荚膜梭菌：两端几乎平切的G＋粗大杆菌；芽胞位于 次极端，呈椭圆形，不大于菌体；在体内有明 显的荚膜；无鞭毛血平板（双层溶血环）生化反应： 血琼脂平板上，双层溶血环（θ、α毒素），“靶样溶血”代谢活跃 高层琼脂断裂试验 庖肉培养基：分解肉渣中的糖类，产酸产气，肉渣淡红色 牛乳培养基：可出现“汹涌发酵”（stormy fermentation）卵黄琼脂平板Nagler反应（＋）庖肉培养基牛乳培养基－汹涌发酵肉毒梭菌3、肉毒梭菌：G＋；芽胞呈椭圆形，粗于菌体，位于次极 端，使细胞呈汤匙状或网球拍状；有鞭毛，无荚膜。示教：小白鼠接种破伤风：痉