仪器分析-荧光分析法(第十二章).ppt

荧光与磷光的比较 荧 光 磷 光 跃迁 激发单重态 最低振动能级→基态 激发三重态 最低振动能级→基态 光电子能量 E激发＞ E荧光＞E磷光 波长 λ激发＜ λ荧光＜ λ磷光 发射时间 10-9~10-7秒 10-4~10秒 6、外部能量转换（external conversion) 过程：如果分子在溶液中被激发，激发分子之间、分子与溶剂 之间会发生碰撞而失去能量，这种非辐射跃迁的过程称 为外部能量转换 特点：发生在激发态的最低振动能级和基态之间；所需时间约 为10-7～10-9秒。 结果：导致荧光或磷光减弱，甚至熄灭 或 （二） 激发光谱与发射（荧光）光谱 激发波长 发射波长 ——荧光物质分子的两个特征光谱 激发光谱(excitation spectrum)： F~ ?ex 荧光光谱(fluorescence spectrum)： F~ ?em （二）激发光谱与荧光光谱 激发光谱：（与吸收光谱类似）表示不同激发波长的辐射引起 物质发射某一波长荧光所得的光谱。 方法：固定发射光波长λem，依次改变激发波长λex，测 荧光强度F，以F-λex作图得荧光物质的激发光谱。 发射光谱：（荧光光谱）固定激发光波长λex，依次改变发射 波长λem，测荧光强度F，以F-λem作图得荧光光谱。 激发光谱与荧光光谱上的λmax是定性定量的依据 荧光光谱的特点（重点） （1）斯托克斯位移：荧光发射波长总是大于激发波长。 原因：无辐射跃迁能量损失，包括振动弛豫和内部能量转换等 （2） 荧光发射光谱的形状与激发波长无关 原因：电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量，产 生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能 级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光(如图)。 （3） 荧光发射光谱与激发光谱的 镜像关系 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一 样）成镜像对称关系。 蒽的激发光谱和荧光光谱 S0 S1* ν=4 ν=3 ν=2 ν=1 ν=0 ν=4 ν=3 ν=2 ν=1 ν=0 b4 b3 b2 b1 b0 c0 c1 c2 c3 c4 ΔE4 ΔE3 ΔE2 ΔE1 ΔE4 ΔE3 ΔE2 ΔE1 蒽的能级跃迁图 镜像关系的原因 基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动能级分布类似 二、分子结构与荧光的关系 1.分子产生荧光必须具备的条件 （1）具有合适的结构：结构中有共轭π→ π*产生的K带， 能吸收紫外-可见光 （2）具有一定的荧光效率（?）： 荧光效率（?）： 荧光效率只能为0～1 荧光效率低的物质可能有强的紫外吸收，但所吸收的能量 以无辐射跃迁的方式释放，不出现荧光发射； 2.分子结构对荧光的关系 （1）跃迁类型： ? → ?*是强吸收带，电子跃迁几率大，荧光效率高； n → ?*是弱吸收带，电子跃迁几率小，产生的荧光极弱； （2）共轭效应： 提高? → ?*共轭度，有利于增加荧光效率，并产生红移 （3）刚性平面结构 刚性共平面结构，电子共轭性增加，荧光强度增大。 （4）取代基效应：芳环上有供电基，使荧光增强。 ①给电子基团引入，φ↑（-NH2，-OH，-OCH3等），增加共轭程度 ②吸电子基团引入，φ↓（-COOH，-NO2，-Cl 等）， 减弱共轭程度 ③影响不大：-SO3H，-NH3+，-R，对共轭体系作用较小 苯 萘 蒽 λex=205nm λem=278nm Φf=0.11 286nm 321nm 0.29 356nm 404nm 0.36 联苯φf=0.2 芴φf=1.0 1、温度：低温， φf ↑。 原因：温度T↑，分子运动加快， 磁撞几率↑无辐射跃迁↑ 2、溶剂： ①溶剂介电常数↑，极性↑，n→π*,ΔE↑,φf↓，λ↓ π→π* ΔE↓,φf↑，λ↑ ②溶剂含重原子或溶解氧（CBr4等)，体系间跨越↑。 使φf↓，甚至熄灭。 ③溶剂粘度σ ↑ ， φf ↑，F↑ 三、 影响荧光强度的外界因素 3、pH影响 对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制；