葛根素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋.docVIP

　　葛根素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋 【摘要】 目的: 研究在慢性低O2高CO2情况下，葛根素对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体途径凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组(N组)、慢性低O2高CO2 2周组(H2PAP、RV/(LV+S)、PAMT、PASMCs胞浆 Bcl-2含量均显著高于N组（P lt;0.01），Cyt-c释放量、Bax含量及肺组织匀浆caspase 9酶活性均显著低于N组（P lt;0.01）；H2PAP、RV/(LV+S)、PAMT、肺弹力型动脉和肺微细动脉PASMCs 中Bcl-2含量均显著低于H4itochondrial-dependent apoptosis pathnary hypertension induced by hypoxic hypercapnia. Methods: Fourty Sprague-Daly divided into four groups: normal control group(N)，hypoxic hypercapnic 2 mitochondria and the content of Bcl-2 and Bax in cytoplasm ined munohistochemistry. The activity of caspase 9 etric method. Results: ①The mPAP, RV/(LV+S), PAMT and the content of Bcl-2 of PASMCs of group H2onary elastic artery and pulmonary arteroles of group H4PAP，RV/(LV+S)，PAMT and the content of Bcl-2 in pulmonary elastic artery and arteroles of group H4onary elastic artery and pulmonary muscular artery and the activity of caspase 9 of lung in group H4onary hypertension and inhibit structural remodeling of pulmonary arteries. Facilitating mitochondrial-dependent apoptosis of PASMCs may be one of the mechanisms of this action. Key onary；mitochondria；apoptosis；Puerarin 低氧性肺血管重建中各种类型细胞凋亡减少而增殖增加[1]。肺动脉平滑肌细胞(pulmonary ar-tery smooth muscle cells，PASMCs)是肺血管壁的主要组成部分，增加PASMCs凋亡可以逆转肺动脉高压肺血管重建[2]。细胞色素C(cytochrome C，Cyt-c) 从线粒体中释放是细胞线粒体途径凋亡的关键步骤[3,4]。线粒体Cyt-c的释放受到Bcl-2蛋白家族的调控，Bcl-2和Bax蛋白是该家族中具有代表性的蛋白，分别起到抑制和促进凋亡的作用[5,6]。葛根素(Puerarin)是豆科植物野葛干燥根中的主要有效成分,大量研究发现，葛根素能促进主动脉平滑肌细胞的凋亡[7]。本实验拟通过研究葛根素对PASMCs线粒体Cyt-c释放、caspase 9活性以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响，探讨葛根素促进PASMCs线粒体途径凋亡是否为其抑制肺动脉高压肺血管重建的作用机制。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物：雄性Sprague-DamPRESS REAGENT Anti-Rabbit Ig多聚过氧化酶二抗(加拿大Vector Laboratories 公司产品)，caspase 9活性检测试剂盒。Bradford蛋白浓度测定试剂盒（江苏碧云天生物技术研究所产品）。其余均为市售分析纯。 1.2 方法 1.2.1 动物模型制备：大鼠40只，随机分为对照组(N组)、慢性低O2高CO2 2周组(H2g/kg体重，郑州羚锐制药有限公司产品，生产批号：0601022)，其条件同H4PAP）、平均颈动脉压力(mCAP)及右心室重量比(RV/(LV+S)%)、中膜厚度(PAMT)的测定：采用右心导管法[8]测量、计算mPAP，颈总动脉插管测mCAP。分离右心室（RV）和左心室（LV）+室间隔（S），滤纸吸水分后分别称重，计算两者的比值RV/（LV+S）。 每只大鼠取1张肺组织HE染色切片，每张切片随