CRIPTO—1在肺腺癌组织中表达及临床意义.docVIP

CRIPTO—1在肺腺癌组织中表达及临床意义 　　[摘要] 目的 检测组蛋白去CRIPTO-1在肺腺癌组织中的表达及其临床意义。 方法 采用免疫组织化学法检测60例肺腺癌及20例正常肺组织中CRIPTO-1蛋白表达的情况，并分析其表达与肺腺癌临床病理特征的关系。 结果 CRIPTO-1蛋白在肺腺癌组织中的阳性表达率（65.0%）显著高于正常肺组织（15.0%），组间比较差异有统计学意义（P 　　[关键词] 肺腺癌；CRIPTO-1；免疫组织化学；表达 　　[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）08（b）-0017-03 　　人的CRIPTO-1基因最初在人畸胎癌cDNA的文库中鉴定出来，因此也被称为畸胎癌来源的生长因子-1（teratocarcinoma-derived growth factor 1，TDGF-1），其基因定位于染色体3p21.3，是表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）-cripto-1-FRL-1-cryptic（CFC）蛋白家族的成员[1]。CRIPTO-1 mRNA和蛋白已经被证实在多种不同类型的肿瘤中高表达，包括乳腺癌、胃癌、卵巢癌及宫颈癌等[1-4]，提示其在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本研究采用免疫组织化学染色法检测CRIPTO-1在正常肺组织及肺腺癌组织中的表达情况，并分析其表达与肺腺癌的分化程度、组织学分型、临床分期及淋巴结转移的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集郑州大学第二附属医院2010年1月～2013年3月肺腺癌切除标本60例，其中，男36例，女24例；年龄34～81岁，平均（55.22±16.2）岁；其中，高-中分化39例，低分化21例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期27例；组织学分型：微乳头型5例，实体型11例，乳头型26例，腺泡型18例；有淋巴结转移者35例，无淋巴结转移者25例。另选取20例远端（10 cm以外）正常肺组织作对照。全部标本均用体积分数40 g/L多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6 μm，分别用于免疫组织化学及常规HE染色。所有患者术前均未接受化疗、放疗、免疫治疗及其他治疗。 　　1.2 主要试剂 　　兔抗人CRIPTO-1单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司公司，免疫组织化学试剂盒、3，3-二氨基联苯胺（digital audio broadcasting，DAB）显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.3 CRIPTO-1免疫组织化学染色 　　采用免疫组织化学SP法，常规脱蜡，PBS清洗，抗原修复，体积分数3%过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，PBS清洗，滴加正常山羊血清封闭，加Ⅰ抗（即用型），4℃冰箱过夜，PBS清洗，加Ⅱ抗，PBS清洗，加Ⅲ抗，PBS清洗，DAB显色。苏木素复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。用Novus Biologicals公司提供的切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。 　　1.4 结果判定 　　CRIPTO-1蛋白阳性信号呈浅黄色至棕黄色颗粒，也位于细胞质内。高倍镜下随机选取5个视野（每个视野观察细胞数不少于200个），按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。采用9分评分制：按照阳性细胞比例≤10%为1分，10%～50%为2分，50%为3分；按染色强弱：阴性为0分；淡黄色染色为1分；中度黄色染色为2分，棕黄色染色为3分。然后按照“阳性细胞得分×染色强弱得分”计总分，总分 　　本研究利用免疫组织化学方法研究肺腺癌组织中CRIPTO-1蛋白的表达，结果提示CRIPTO-1 蛋白高表达于肺腺癌组织中，而正常肺组织中CRIPTO-1蛋白表达的阳性率非常低，提示从正常肺组织到肺腺癌组织的发生、发展及其演进的过程中，CRIPTO-1可能起到了非常重要的作用。笔者进一步分析了CRIPTO-1蛋白的表达与临床病理学参数之间的关系，结果发现CRIPTO-1蛋白表达与肺腺癌的分化程度、临床分期、组织学分型和淋巴结转移均密切相关，提示该基因可能在肿瘤的浸润、转移过程中发挥关键性的作用，但具体的分子机制还有待进一步探讨。 　　[参考文献] 　　[1] Bianco C，Castro NP，Baraty C，et al.Regulation of human Cripto-1 expression by nuclear receptors and DNA promoter methylation in human embryonal and breast cancer cells[J].J Cell Physiol，2013，228（6）：1174-11