VEGF—165—GMs复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损实验研究.docVIP

VEGF—165—GMs复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损实验研究 　　【摘要】 目的 探讨VEGF-165-GMs复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损的效果。方法 24只新西兰大白兔双侧桡骨均建立1.5 cm的陈旧性骨缺损实验模型， 随机分为A、B、C三组， A组植入自体颗粒骨+VEGF-165-GMs 1mg；B组植入200 mg自体颗粒骨；C组 VEGF-165-GMs 1 mg；分别于术后3、6、9周切取标本，通过X线摄片、骨密度测量、生物力学测试、组织形态学观察等手段，观察各个时期新骨形成的情况。结果 A、B组均能较好地修复陈旧性骨缺损， A组术后各时间点X线评分、骨密度测量、生物力学测试、组织形态学观察均明显优于B组。C组各时间点均无骨性愈合迹象， 9周时可见骨断端完全硬化， 髓腔封闭。结论 VEGF-165-GMs复合自体颗粒骨修复陈旧性骨缺损可以明显促进局部血运重建， 促进新生骨形成， 提高骨改建塑形的速度和质量。 　　【关键词】 血管内皮生长因子-165；自体颗粒骨 ；陈旧性桡骨缺损；骨修复 　　由于自体骨移植无免疫排斥反应， 组织相容性好， 生物学潜能大， 骨诱导和传导作用强， 是骨缺损治疗的“金标准”。移植骨在植入人体后能否发挥最大作用， 很大程度取决于其与宿主的血运重新建立， 移植骨的血管化是骨修复的关键环节， 因此早期建立有效血供对提高自体骨移植的疗效有着重要意义。血管内皮生长因子-165（Vasular endothelial growth factor-165，VEGF-165）通过与血管内皮细胞膜上受体结合， 具有强大特异性促血管内皮细胞增生和血管生成作用， 是促进血管再生的最后通道。本实验探讨应用自体颗粒骨复合VEGF修复陈旧性骨缺损的能力， 为临床应用提供理论依据。并考虑到VEGF在局部代谢快、作用不持久的问题， 决定将VEGF-165制成缓释载体（Vasular endothelial growth factor-165-gelatinmierospheres， VEGF-165-GMs）， 从而为进一步应用于骨组织工程研究提供一定依据。 　　1 材料与方法 　　1. 1 实验材料和仪器 新西兰大白兔24只（48条桡骨）（广东医学院实验动物中心提供）， 体重2.5～2.8 kg；VEGF-165 （Pepro Tech北京博蕾德生物有限公司分装） ；双能X线密度仪（ GE Lunar Prodigy 暨南大学附属医院核医学科）；生物力学试验机（MTS 858 Mini Bionix南方医科大??生物力学实验室） 　　1. 2 VEGF-165-GMs制备 采用改良的双相乳化冷凝交联法制备明胶微球[1]， 并检测明胶微球的物理性质， 以及结合和体外缓释VEGF-165性能和规律（另文发表）。证实VEGF-165明胶缓释微球有良好的药物包封、缓释功能， VEGF-165-GMs载药率为0.2%。 　　1. 3 VEGF-165-GM复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损 参照文献报道制作兔桡骨陈旧性骨缺损模型[2]并随机分为三组：A组（9只18条前臂）：植入200 mg自体颗粒骨+VEGF-165-GMs 1mg；s B组（9只18条前臂）：植入200 mg自体颗粒骨；C组（6只12条前臂）：植入VEGF-165-GMs 1 mg。 　　手术方法：①在按前文所述建造的兔陈旧性骨缺损模型上， 于双侧桡骨原切口入将骨折端硬化部分连同纤维瘢痕组织一并切除， 将闭锁的髓腔开放， 经处理后的骨缺损段长1.5 cm ；②取一侧自体髂骨块在冰盐水中用磨钻磨成颗粒骨，离心收集；③A组植入200 mg自体颗粒骨， 1 mg VEGF-165-GMs充分混合， 形成复合物， 用内径0.6 cm、长1.5 cm管状物塑形后植于骨缺损部位；B组植入200 mg自体颗粒骨混合物；C组植入植入塑形的1mg VEGF-165-GMs；④ 逐层缝合切口。分为术后3、6、9周三个时间点观察， A、B组各时间点随机处死3只兔， C组各时间点各处死随机2只兔。 　　1. 4 检测项目及方法 （1）X线观察 行动物双侧前肢X线正位片检查， 评估各时间点的骨形成及骨塑性构建情况。（ 2） 骨密度检查： 取6、9周兔桡骨利用双能X线骨密度仪小动物用骨密度测量软件检测包括骨缺损区在内桡骨中段2.0cm骨密度。（3）生物力学检查： 取6、9周标本进行桡骨三点弯曲试验。（4）病理组织学： 在普通光学显微镜下观察骨缺损修复及颗粒骨与周围骨质融合情况。 　　1. 5 统计学分析 统计学检验实验数据用SPSS13.0 for windows统计软件分析， 计量资料用均数±标准差（x-±s）表示， P 　　三点弯曲桡骨位移桡度统计结