一种磷脂酶A2抑制剂外高通量筛选方法的建立.docVIP

PAGE PAGE 7 一种磷脂酶A2抑制剂体外高通量筛选方法的建立 朱京童 郑智慧 路新华 范玉玲 张华 贺建功 （华北制药集团新药研究开发中心，微生物药物国家工程研究中心 石家庄050015） 摘要：目的：磷脂酶A2(PLA2)是一个重要的抗炎和心血管疾病药物靶点，本研究拟建立一种荧光的磷脂酶A2 (PLA2)抑制剂体外高通量药物筛选方法。方法：以7-Hydroxycoumarinyl-arachidonate为荧光底物，水解产物在355ex/460em下有特定荧光，间接反映酶活性。利用96孔板，通过对酶浓度、反应时间等多个条件的优化，摸索最佳的反应条件。利用阳性药二乙烯三胺五乙酸进行模型验证。结果：在酶浓度2.25U/ml、底物浓度30μM和反应时间30min时，为最适反应条件。阳性药在该模型上表现出好的浓度剂量依赖抑制效果，IC50为0.37μmol/L。利用该模型，本研究从微生物次生代谢产物筛选得到两个活性化合物F02ZA-2396A、F02ZA-2396B，其IC50分别为152μM和72μM。结论：本研究建立了一个高通量的磷脂酶A2抑制剂体外药物筛选方法，该方法灵敏、快捷、可操作强，可用于各种来源的化合物的快速活性筛选。 关键词：磷脂酶A2；抑制剂；体外；荧光法 A fluorescence-based method on the high throughpu