实验三 骨髓法制备小白鼠 染色体标本.ppt

实验三? 骨髓法制备小白鼠 染色体标本;一、实验目的 ; 在骨髓细胞中，有丝分裂的指数是相当高的，通过注射秋水仙素使正在分裂的细胞停止在有丝分裂中期，再经过低渗、固定、滴片就可以获得大量的骨髓细胞染色体分裂相。; 1、研究染色体的材料 ; 2、研究染色体的方法 ;三、实验材料、仪器和试剂;1、秋水仙素处理：取骨髓前2～3h，给小白鼠腹腔注射秋水仙素液（注射剂量为2μg/g小白鼠体重）;2、杀鼠取髓： 采用脱颈椎法处死小白鼠。用剪刀剪开后腿上的皮肤和肌肉，取出股骨，剔净皮肉，再用剪刀剪掉股骨两端，用注射器分两次吸取0.075MKCl溶液（共5ml）通过针头注入骨髓腔缓慢将细胞冲入离心管，反复冲洗直到骨髓腔发白为止。;注意事项：;3、低渗：将获得的骨髓悬液用吸管立即将细胞团吹散打匀，两组同时放入37℃恒温水浴锅内低渗30min。低渗结束时，向试管中加入加预固定液（甲醇：冰乙酸＝3:1，现配现用）8～10滴 ，混合均匀（以防细胞结团），平衡（注意2管同时离心）后1000r/min离心10min，弃上清。 ;4、第一次固定：在弃去上清液的试管中。 加入新配的3:1甲醇冰醋酸固定液5~6ml，用吸管轻轻吸打均匀，室温静置30min进行第一次固定。平衡后1000r / min离心10min，弃上清（可留0.5ml） 。 5．第二次固定：在弃去上清液的试管中。加入新配的3:1甲醇-冰醋酸固定液5~6ml，用吸管轻轻吸打均匀，室温静置30min进行第二次固定。平衡后 1000r / min离心10min ，弃上清（留0.2ml左右） 。;6、滴片：在弃去上清液的试管中加入适量（2～10滴，在老师辅导下加）新配固定液，用吸管吹打均匀制成细胞悬液，滴2～3滴于冰冻的载玻片上，立即用嘴吹气使细胞迅速分散，在载玻片后面一角写上学号，空气干燥。 7、染色：将染色体制片细胞面朝下反扣于染色板上，用1：9Giemsa稀释液染色30min，小水流自来水冲洗浮色，空气干燥后，显微镜下观察。 ;小白鼠睾丸细胞分裂10倍物镜下;小白鼠的染色体分裂相（2n＝40）;五、骨髓法需要注意的问题;低渗的作用？;预固定的作用？;固定的作用？;六、作业;谢谢!