在大肠腺癌中的应用（ppt73）课件.ppt

EphA2基因的介绍 EphA2是Lindberg于1990年用简并引物从人角化细胞cDNA文库中筛选得到的一个Eph（Erythropoitin-produceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员 。 人EphA2基因定位于1p36.1,有17个外显子。 Eph受体家族是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体(receptor tyrosine kinase, RTK)家族最大的家庭。 Eph家族受体激酶和他们EFN配体介导的细胞信号传 导参与神经系统的基本发生过程、神经系统的信号传 递，在细胞的分化、发育、增殖，组织和器官的形成、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及肿瘤的发生和肿瘤的新生血管的形成等过程中发挥重要的和必不可少的作用。 EphA2与肿瘤的关系 EphA2广泛高表达于不同的肿瘤组织和细胞系，如：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，肾细胞癌等，目前认为EphA2参与肿瘤的发生和发展，是功能强大的癌基因。 EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细胞在体内、外的恶性转化，并促进其侵袭转移 。 应用EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验，下调EphA2蛋白表达的同时，也抑制了肿瘤细胞的生长，进而降低肿瘤的恶性程度 。 临床病理资料 154例（88例存档石蜡包埋标本和66例手术切除新鲜大肠腺癌标本）大肠腺癌患者，术前均未接受化疗、放疗及其他治疗。其中男性 78例，女性 76例，年龄在 23-85岁之间，平均年龄为 49.7岁。 66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌： 分化程度:高分化腺癌30例，中分化腺癌23 例，低分化腺癌13例。 浸润深度:粘膜层10例，粘膜下层0例，肌层14例，浆膜层37例，外周组织5例。 转移：有淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者50例；有血道转移者1例，无血道转移者65例；无种植性转移。 88例存档蜡块全部为腺癌: 分化程度：高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化29例和未分化20例； 浸润深度：粘膜层62例，粘膜下层1例，肌层17例、浆膜层5例，外周组织3例； 转移：有淋巴结转移者14例，无淋巴结转移者74例；有血道转移者11例，无血道转移者77例；有种植性转移者10例，无种植性转移者78例 。 FCM实验步骤： FCM对照组设计和诊断标准： 设正常对照组：用正常人外周血淋巴细胞，即二倍体细胞作为DNA含量 和肿瘤细胞DNA倍体、细胞周期的参考标准 DNA倍体分析:用Partec流式细胞仪,计数10000个细胞,具有相同DNA含 量的细胞群表现为直方图中独立的峰,即每个峰表示一定DNA含量或倍体 的细胞亚群。在正常对照组中,第1个峰代表单倍体(2C)细胞亚群,在实验 组中，第1个峰代表双倍体(G0/G1 ,2C)细胞亚群,第3个峰则代表四倍体 (G2/M，4C)细胞亚群，两峰之间代表S期细胞亚群。计算机系统算出每 个峰下的面积所表示的该倍体的细胞占全部细胞的百分比。 诊断标准:根据左连富的标准,DNA倍体单倍体细胞百分数与正常对照组 单倍体细胞平均百分数相比较,在其两个标准差之内为正常,否则为异常。 FCM计算标准： DNA指数(DI)计算公式：DI=样品细胞G1峰道数均值÷正常组织细胞G1峰道数均值。 DNA含量分析:以DNA指数(DI)表示细胞DNA相对含量，根据DI值判断DNA倍体。0.9≤DI ≤1. 1 为DNA二倍体;DI < 0. 9 或> 1. 1 为异倍体。 细胞周期分布的计算：运用DNA细胞分析软件，计算出各时相的分布百分比，以S期细胞比率(SPF)和增殖指数（PI）表示细胞的增殖活性。 SPF( %) = [ S ÷( G0/ G1 + S + G2M) ] ×100 % PI=[(S+G2)÷（G1+S+G2）]×100% 所有数据均经SPSS 12.0软件进行统计分析。计数资料计算阳性率，计量资料用采用X±S表示；阳性率之间的比较采用χ2检验（chi-square）及Fisher确定概率计算法；两组均数的比较用t检验(t-test)；两组以上均数的比较用方差分析（ANVOA）和 Spearman等级相关分析；两变量之间的关系分析采用相关分析；多变量之间的关系分析采用秩和Chi-sguare 检验；行程列表Chi-sguare检验。显著性水准α=0.05。 大肠腺癌组织及正常粘膜组织中EphA2蛋白的表达 免疫组化检测结果： EphA2蛋白定位于癌细胞、粘膜上皮细胞及癌组织血管内皮胞浆内，呈棕黄色。 阴性对照均无阳性显示。 二.EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌组织中血管内皮细胞的比较 EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系