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细黄链霉菌抑制草莓重茬病效果研究 　　摘要 以实验室保存的抗生菌为出发菌株，选择一株对引起草莓重茬病的镰刀菌、丝核菌拮抗作用强的菌株，经鉴定为细黄链霉菌，确定生产培养基为豆饼粉4%、锯末12%、甘薯粉12%、细肥土35%、石灰2.0%，种龄为20～24 h的液体菌种，接种量为5%，培养基湿度在30%～35%，发酵初期室内湿度控制在60%左右，基质开始转粉时降低空气湿度在50%左右。 　　关键词 草莓重茬病；细黄链霉菌；抗生菌 　　中图分类号 S436.68 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）20-0113-02 　　草莓重茬病一直是困扰草莓生产的重要问题，尤其是随着设施产业的不断扩大，这个问题越来越突出。目前，草莓要连续种植普遍采用的方法就是溴甲烷土壤熏蒸法，但该药的使用成本高，药效时间短，且溴甲烷是剧毒气体，对大气臭氧层破坏严重。大量有毒药剂的使用使土壤的理化性质进一步恶化，肥力降低，有毒物质积累，严重影响草莓的品质和产量。造成作物重茬的主要原因是土传病害和土壤营养元素的缺乏[1-2]。同一作物的耕作、施肥、灌溉等方式固定不变，连年耕作，使土壤环境恶化，肥力降低，有毒物质积累，有益微生物菌群数量减少，引发病原微生物的大量滋生[3]。同一作物根系分布范围及深浅一致，吸收养分相同，极易导致某种营养的消耗量增加，该耕作层某种养分缺失，在连作作物中表现更为严重。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试草莓拮抗菌株：实验室保存的多株放线菌株。草莓土传病菌：镰刀菌（Fusaricm oxysporum）、丝核菌（Rhizoctonia solani Kuho），从保定满城草莓园分离并保存。供试培养基：放线菌培养采用高氏1号合成培养基，土传病菌培养采用PDA培养基。靶标菌株：镰刀菌（Fusaricm oxysporum）、丝核菌（Rhizoctonia solani Kuho）。试验菌株：放线菌J-32。栽培盆：20 cm的塑料盆，取田间细肥土，灭菌，每盆装土10 kg。栽培槽（长×宽=100 cm×30 cm）装土，500 mL罐头瓶、纱布、牛皮纸若干。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 抗生菌菌株的筛选。①菌种活化：将实验室保存的放线菌种活化备用，靶标菌活化。②菌株筛选方法：将活化好的放线菌株，在高氏1号培养基平板上培养3 d后，分别以镰刀菌和丝核菌为靶标菌，采用对峙培养法测定拮抗作用。方法为：取活化的靶标菌菌饼（Φ5 mm）置于PDA平板（Φ90 mm）一侧，用接种环挑取适量拮抗菌在平板另一侧，30 ℃培养5 d后测量抑菌带宽度，每处理设3次重复[4]。 　　1.2.2 室内盆栽试验。为了进一步验证放线菌株J-32对草莓致病菌的抑菌效果及其在土壤中的定殖性能，特进行室内盆栽试验。回接靶标菌，分别测定其对土传病害的防治效果。将放线菌J-32的斜面制成含孢子量为1×106个/mL的孢子悬液，摇匀后接入盆栽草莓的根际，每株秧苗接入2 mL，1周后以同样方法制备靶标菌菌悬液接入草莓的根际，每株秧苗接入2 mL。以不接放线菌的处理为对照（CK）。①以丝核菌测定放线菌J-32的防治效果：选用苗龄20 d的草莓苗移栽到盆中，每盆5株，5次重复。②以镰刀菌测定优选菌株的防治效果：选用苗龄2个月的草莓苗移植到栽培槽中，每槽10株，5次重复。 　　1.2.3 J-32菌剂生产工艺的确定。液体种子制备方法：培养基含玉米粉2%、豆饼粉2%、淀粉1%，摇瓶培养，转速180 r/min，28～30 ℃培养24 h。固体种子制备方法：培养基含小米100 g、KNO3 0.1%、MgSO4 0.05%、NaCl 0.05%、K2HPO4 0.05%、牛肉浸膏0.1%、麸皮10%，调pH值至7.0～7.2。将以克氏瓶（高氏1号培养基）培养成熟的J-18菌孢子接入固体种子培养基中，培养5～7 d，孢子成熟后作为固体种子备用。 　　2 结果与分析 　　2.1 放线菌对靶标菌的抑菌效果 　　8株放线菌对靶标菌均有较好的抑制作用，其中J-88对镰刀菌抑制作用最大，其次为J-32；J-32对丝核菌的抑制作用最大，其次为J-88，具体见表1。 　　2.2 盆栽草莓发病情况 　　在试验中观察发现，加入抗生菌后草莓苗生长健壮，发病率低，具体见表2。 　　2.3 J-32菌剂生产工艺的确定 　　2.3.1 培养基质的选择。试验选择8组培养基质配方，分别接入液体菌种，30 ℃温箱培养。观察生长情况，并以培养结束后测定孢子数，确定较适宜的培养基质，其中较好的2组培养基质的培养结果见表3。 　　由于第2组物料成本相对较低，所以在此培养基的基础上做正交试验，进一步确定各种成分的具体含量，因素水平见表4，正交试验结果