第五讲-基因表达调控.pptVIP

第五讲 基因的表达调控 基因表达调控的基本概念 原核基因调控机制 乳糖操纵子 真核转录水平上的调控机制 酵母双杂交技术 基因表达调控的基本概念 基因表达调控的层次 DNA和染色体水平的调控：通过基因扩增、重排等机制来调节基因表达。 转录及转录后水平的调控：调控mRNA的合成、转运及加工过程等。这是生物在进化过程中选择的最经济、最有效的调控方式。 翻译及翻译后水平的调控：调控多肽链的合成速度、氨基酸残基修饰及蛋白质的折叠等过程。 二、基因表达的方式 组成性表达(constitutive expression) 适应性表达(adaptive expression） 1、组成性表达： 2、适应性表达 指环境的变化容易使其表达水平变动的一类基因表达。 应环境条件变化基因表达水平增高的现象称为诱导(induction)，这类基因被称为可诱导的基因(inducible gene)； 相反，随环境条件变化而基因表达水平降低的现象称为阻遏(repression)，相应的基因被称为可阻遏的基因(repressible gene)。 三、基因表达的规律 ——时间性和空间性 1、时间特异性（temporal specificity） Survivin基因的表达 基因表达的多级调控 原核生物 转录翻译在同一时间空间发生，基因表达调控主要发生在转录水平。 真核生物 有细胞核，转录和翻译过程在时间和空间被隔开，且在转录和翻译后都有复杂的信息加工过程，基因表达的调控可以发生在各种不同的水平。 四、基因表达调控的生物学意义 适应环境、维持生长和增殖（原核、真核）  维持个体发育与分化（真核） 原核基因调控机制 2、操纵子的定义 操纵基因：是一段能被调控蛋白特异性结合的DNA序列。操纵基因常与启动子邻近或重叠，当调控蛋白结合在操纵基因上，会影响其下游基因转录的强弱。 调控基因：是编码能与操纵基因结合的调控蛋白的基因。 可诱导调节：指一些基因在特殊的代谢物或化合物的作用下，由原来关闭的状态转变为工作状态，即在某些物质的诱导下使基因活化。 例：大肠杆菌的乳糖操纵子 分解代谢蛋白的基因 可阻遏调节：基因平时是开启的，处在产生蛋白质或酶的工作过程中，由于一些特殊代谢物或化合物的积累而将其关闭，阻遏了基因的表达。 例：色氨酸操纵子 合成代谢蛋白的基因 酶合成的阻遏操纵子模型 乳糖操纵子(lac operon) 内容提要： 乳糖操纵子的结构 酶的诱导——lac体系受调控的证据 乳糖操纵子调控模型 影响因子 Lac操纵子中的其他问题 一、乳糖操纵子的结构 lacZ编码β-半乳糖苷酶，催化乳糖转变为别乳糖(allolactose)，再分解为半乳糖和葡萄糖； lacY编码乳糖透过酶，促使环境中的乳糖进入细菌； lacA编码转乙酰基酶，催化半乳糖乙酰化，可能参与不能分解的β-半乳糖的乙酰化而解毒和排出细胞。 lacI基因的表达产物称为乳糖操纵子阻抑蛋白（lac repressor）。它的功能是阻止结构基因的表达。因此，乳糖操纵子的调控属于负调控。 二、酶的诱导——lac体系受调控的证据 异丙基硫代-β-D-糖苷（IPTG）虽然不能被β-半乳糖苷酶分解，但它是乳糖操纵子非常有效的诱导物。 这种能诱导酶合成，但不能被酶分解的分子称为义务诱导物（gratutious inducer）。义务诱导物由于能在细胞内保持原型不变，因此很有用处，而真正的诱导物会被代谢分解掉。 用于蓝白斑筛选实验的质粒载体 三、乳糖操纵子调控模型 主要内容： ① Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码 ② 这个mRNA分子的启动子紧接着O区，而位于I与O之间的启动子区（P），不能单独起动合成β-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。 ③ 操纵基因是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。 ④无乳糖（诱导物）时，Lac操纵子处于阻遏状态。lac I基因在其自身的启动子Pi控制下，低水平、组成性表达产生阻遏蛋白，每个细胞中仅维持约10个分子的阻遏蛋白。  阻遏蛋白结合为四聚体结构，其中的一个二聚体的DNA结合结构域与Lac操纵子的O1区（中心位于+11）紧密结合 ，另一个二聚体的DNA结合结构域与O2（+410bp处）或O3（-83bp处）疏松结合，将DNA拉成环状 。 ⑤当有诱导物（乳糖）存在时，它与阻遏蛋白结合，改变其三维构象，使之不能与操纵基因结合，启动子能够顺利起始lac mRNA的合成 四、影响因素 1、lac操纵子的本底水平表达 有两个矛盾是操纵子