离体保存对野生毛葡萄试管苗生长及叶片抗氧化酶活性影响.docVIP

离体保存对野生毛葡萄试管苗生长及叶片抗氧化酶活性影响 　　摘 要： 【目的】为阐明缓慢生长法离体保存野生毛葡萄试管苗的机制，【方法】以野生毛葡萄‘花溪-9’为试材，利用缓慢生长法成功离体保存了供试材料试管苗，并从叶片解剖结构和生理生化变化2个方面阐述了毛葡萄试管苗离体保存存活率与叶片结构和抗氧化酶活性间的关系。【结果】温度、光照和烯效唑（S3307）对野生毛葡萄离体保存效果均有影响，其影响顺序为S3307温度光照，且3因素两两之间互作效应明显。野生毛葡萄在低温（10±2）℃、光照10 μmol·m-2·s-1（12 h·d-1）和添加0.1 mg·L-1 S3307的1/2MS+0.05 mg·L-1 IBA+0.1 mg·L-1 IAA+ 3%蔗糖+0.5%琼脂粉的培养基上保存效果良好，存活率可达86.33%。离体保存存活率较高的试管苗叶绿素含量和膜质过氧化产物MDA含量较低，保护酶（SOD、CAT、POD）活性强，渗透调节物质可溶性蛋白含量高，叶肉细胞的紧密度提高，单位面积内细胞数量增多。【结论】适宜的离体保存方法增加了毛葡萄叶肉细胞的紧密度，提高了试管苗的抗氧化能力，这可能是缓慢生长法离体保存成功的重要机制之一。 　　关键词： 毛葡萄； 缓慢生长法； 生理响应； 结构变化； 种质保存 　　中图分类号：S663.1 文献标志码：A 文章编号：1009-9980？穴2013？雪04-0615-06 　　种质资源是物种进化、遗传学研究及育种工作的物质基础，随着人类生产实践活动的不断深入和气候的异常变化，大量资源遭到了破坏，甚至灭绝，种质资源保护已成为一项世界性课题[1-5]。田间种植保存费用高，且仍面临着资源损失的危险；种子库保存则对有性繁殖困难的果树资源无能为力[5]。自离体保存策略[6-7]提出以来，该项技术受到了果树科学工作者的高度重视，已成功应用到多种果树种质资源的保存中[8-12]。目前关于果树种质资源离体保存研究主要集中在保存方法的探索、改良及遗传稳定性检测方面[12-18]，较少见到离体保存过程中保存材料的生理机制变化方面的研究，而探讨离体保存材料的生理变化机制与离体保存条件的关系，可深入了解离体保存的机制，有针对性地调整保存条件，增强方法探索中的针对性。本文以中国野生毛葡萄优株‘花溪-9’为试材，研究了不同离体保存条件下‘花溪-9’保存10个月后的相关形态和生理指标变化，并探讨了离体保存存活率和各项指标间的关系，以期探讨野生毛葡萄离体保存过程中生理响应机制，为野生毛葡萄离体保存提供科学的方法；并为探讨果树资源离体保存机制提供依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　以野生毛葡萄（Vitis heyneana Roem. Schult ）优株‘花溪-9’离体快速繁殖的组培苗为试材。试验于2009—2010年在贵州省果树工程技术研究中心进行。 　　1.2 试验设计与离体保存保存方法 　　1.3 离体保存植株的生长及生理指标测定 　　1.4 叶片解剖结构观察 　　选取保存效果最好的叶片进行解剖结构观察，以T0为对照。剪取叶柄上方1 cm处长约5 mm叶片小块，立即放入FAA溶液中固定；采用常规制片法制片，在Olympus光学显微镜下观察，并用Motic Image Advances3.2软件采集图片并测量单位面积栅栏组织和海绵组织细胞个数。30次重复。 　　1.5 数据统计与分析 　　采用SAS分析软件进行多因素方差分析和相关性分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 离体保存对毛葡萄存活率及植株生长状况的影响 　　离体保存效果的好坏取决于离体保存时间的长短和保存存活率的高低。离体保存条件下，植株存活率高，生长相对缓慢，保存时间较长，则适合该物种离体保存。由表2可见，与对照相比，离体保存10个月后，毛葡萄的存活率不同程度的下降，但不同方法间差异很大，其存活率高低顺序为T1T4T2T6T7T8T5T3T9。结合植株生长情况来看（图版-T0～T9），在T1保存条件下，保存存活率最高，且植株生长相对缓慢，保存效果最优；其次是T2、T4和T7，但3者的长势略强；尽管T8的存活率略低，但在此条件下，毛葡萄生长较为缓慢，也可用于毛葡萄的离体保存。多因素分析表明，光照、温度及生长抑制剂S3307对野生毛葡萄存活率和生长势均有显著的影响，且不同的因素间互作效应显著；3个影响因素中S3307的影响最为明显，其次是温度，光照的影响相对较小（结果未列出）。 　　2.2 毛葡萄离体保存对生理特性的影响 　　2.2.2 离体保存条件下毛葡萄叶片丙二醛含量变化 由图2可见，不同的离体保存条件下毛葡萄叶片内MDA含量差异很大。与对照相比，T1、T2、T8保存条件下，叶片MDA含量有所降低，而其他6个保