中国恒河猴SIVmac239艾滋病模型亚急性期实验观察.docVIP

中国恒河猴SIVmac239艾滋病模型亚急性期实验观察 　　[摘要] 目的：观察SIVmac239中国恒河猴艾滋病模型亚急性期内T淋巴细胞亚群、病毒载量指标变化情况，探讨中国恒河猴艾滋病模型亚急性期病毒学相关指标变化特征。方法：采用SIVmac239病毒株静脉接种健康中国恒河猴复制中国恒河猴艾滋病动物模型，观察猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus， SIV）感染后动物模型亚急性期内T淋巴细胞亚群指标变化、病毒载量变化情况。同时记录动物模型临床症状情况。结果：健康恒河猴接种病毒株后3个月体重及BMI指数比较稳定，各时间点差异不显著，在感染第10～14天病毒载量达到高峰（6.72±0.44）个lg，此后整体表现为水平波动下降趋势。T淋巴细胞亚群在感染后出现显著改变，CD3，CD4，CD8计数和百分比有不同程度的变化；CD4/CD8比值感染后2周内明显下降，一般在病毒载量高峰时表现为最低比值为（0.86±0.29），随后比值缓慢波动上升。感染3个月内共有3只感染猴临床症状明显，其中1只出现腹泻、2只出现摄食下降等临床症状。结论：中国恒河猴艾滋病动物模型与国外印度恒河猴艾滋病动物模型亚急性期相似，研究内容为中国恒河猴应用于艾滋病模型研究的标准化建立补充了更详尽的亚急性期变化内容。 　　[关键词] 艾滋病；亚急性期；恒河猴；SIV 　　艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是因机体感染人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）导致全身免疫系统毁灭性打击所出现的获得性免疫缺陷综合症[1-2]。恒河猴的基因序列、血液生化指标等与人相近[3-6]，感染猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus， SIV）病毒后发病机制、过程、临床症状表现与人艾滋病相似[7-9]，可在感染病毒后出现免疫体系的损害和多系统多器官组织的病变，所以猴艾滋病模型成为艾滋病研究的一个金标准，并为WHO所推荐[10]。国外恒河猴猴艾滋病模型多采用印度恒河猴建立。中国恒河猴应用于艾滋病模型在国内虽然较为常见，但对感染亚急性期模型的研究结果报道较少，而且并不详细，这对中国恒河猴应用于艾滋病模型研究的标准化建立带来了亚急性期研究内容的缺失。本研究针对SIVmac239感染中国恒河猴亚急性期3个月内各监测指标进行了较为深入的研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 试验研究对象为15头中国恒河猴，雄性，体重4.5～6.5 kg，3～5岁，平均年龄为（3.91±0.67）岁。外观健康，体检无浅表淋巴结肿大，经检测结核菌素试验阴性和胸部X光片正常，痢疾菌阴性，血清学SIV、猴逆转录D病型毒（SRV）、猴B病毒（BV）、猴T淋巴细胞I型病毒（STLV-I）抗体阴性。试验动物购自广东省灵长类动物实验中心。实验动物合格证明证号SCXK（粤）2009-0025。 　　1.2 实验环境 本研究在广东省长类动物实验中心进行，实验场地为生物安全2级实验室，动物实验设施检验编号C2009022。动物单笼饲养在不锈钢笼具中，每天投3次饲料，自由饮水。室温20～25 ℃，相对湿度50%～70%。 　　1.3 实验动物医学伦理 本实验经广东省长类动物实验中心动物伦理委员会批准（文件编号K09004-IACUC），实验严格按照广东省长类动物实验中心标准操作/作业流程执行，并按照K09004-IACUC文件中内容给予相应的动物福利。 　　1.4 主要试剂与仪器 血常规采用HORIBA ABX PENTRA 60全自动血细胞分析仪分析（由高要市康达公司检测）；外周血T淋巴细胞亚群检测采用美国BD公司的FACSCalibur型流式细胞仪，检测用荧光标记单克隆抗体CD3-别藻蓝蛋白（ APC），CD4-多甲藻叶绿素蛋白（PerCP），CD8-藻红蛋白（PE）均购自美国BD 公司； SIV RNA 抽提采用一管式体液病毒核酸抽提试剂[11]逆转录酶、RNA 酶抑制剂、探针法荧光定量PCR 试剂盒均购自立陶宛Fermentas公司； 荧光定量PCR 检测采用ABI-7300 PCR仪（美国生物系统公司）测定。 　　1.5 中国恒河猴艾滋病模型 模型建立参照文献进行复制[12-13]。SIVmac239病毒株，由中国科学院昆明动物研究所郑永唐博士馈赠，广州中医药大学热带医学研究所保存。病毒滴度为5.0×105组织半数感染量（TCID50）/mL，动物以氯胺酮7 mg·kg-1麻醉后以5MID100（100%感染剂量）经静脉注射1 mL感染动物。感染后2周，以血浆病毒分离阳性证实病毒感染模型成功。 　　1.6 艾滋病中国恒河猴动物模型亚