葛根素对缺血大鼠纹状体氨基酸的抑制作用.docVIP

葛根素对脑缺血大鼠纹状体氨基酸的抑制作用 徐晓虹1,*，郑筱祥2，李惠2,3 （1浙江师范大学化学与生命科学学院，金华，321004 2浙江大学生物医学工程教育部重点实验室，玉泉校区，杭州，310027 3浙江科技学院，杭州，310027） 摘要 目的：研究葛根素（puerarin, Pur）对脑缺血诱导纹状体细胞外液氨基酸水平的影响。方法：大脑中动脉栓塞（MCAO）法建立大鼠右侧局部脑缺血，60 min后退出栓线再灌注。给药组在脑缺血开始前30 min和再灌注开始时腹腔注射Pur (50, 100 mg/kg, ip)，模型对照组给予同体积的溶媒。用脑微透析仪收集缺血前后和再灌注过程的纹状体细胞外液，高效液相色谱分析其兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸水平；缺血再灌注24 h取脑用TTC染色法测算脑梗死体积和水肿率。同时用流式细胞仪结合Annexin-V荧光标记法检测Pur (40, 100 μM)对体外培养海马神经细胞谷氨酸(0.5 mM)诱导细胞凋亡的保护作用。结果：缺血开始后，纹状体的天门冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸(GABA)、牛磺酸（Tau）四种氨基酸水平快速升高，在缺血30~60 min 均达到最高值；其峰值分别达缺血前的8.92, 14.15, 9.07和4.84倍。再灌注开始后，氨基酸水平迅速下降；60 min后下降趋缓，到再灌注120 min，氨基酸水平接近正常；再灌注24h到7d 氨基酸水平稳定，与缺血前无显著差异。100 mg/kg Pur在减小脑梗死体积和脑水肿的同时(P0.05), 显著降低脑缺血过程纹状体氨基酸水平，其最高值分别比缺血组降低了35.7%（Asp）、43.2%(Glu)、28.5%(GABA)和31.8%(Tau) (P0.01)；Glu/GABA比值明显低于缺血大鼠。同时流式细胞检测结果表明，100 μM Pur明显抑制谷氨酸的兴奋毒性作用，分别使海马神经细胞的凋亡率和坏死率减少33.1% 和 35% (P0.01)。结论：Pur可有效抑制脑缺血诱导的纹状体细胞外氨基酸水平升高和谷氨酸兴奋毒作用，该机制可能与Pur的抗脑缺血作用有关。 关键词：葛根素；脑缺血；脑微透析；氨基酸递质。 通讯作者: 徐晓虹 Tel: 086-0579-2291361 Email: xuxh63@zjnu.cn 浙江省自然科学基金(No.M303042)，浙江省心脑血管、神经系统药物评价和中药开发重点实验室，和浙江师范大学博士基金资助 Inhibitive effects of puerarin against excitatory amino acid efflux in striatum of cerebral ischemic rats XU Xiao-hong 1,*, ZHENG Xiao-xiang 2, LI Hui 2,3 (1College of Chemistry and Life Sciences, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004 China 2Dept. of Biomedical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou, 310013, China 3 Zhejiang University of Science and Technology, Hangzhou, 310013, China) ABSTRACT OBJECTIVE: To investigate the inhibitive effects of puerarine (Pur) against excitatory amino acid efflux in striatum of cerebral ischemic rats. METHODS: Male SD rats were subjected to 60 min of transient middle cerebral artery occlusion (MCAO) followed by reperfusion. Pur (50, 100 mg/kg, ip) was administrated 30 min before MCAO and at the onset of reperfusion. The infarct rate and edema rate were detected on TTC-stained coronal sections. The extracellular levels of amino acid transmitters were monitored in the striatum of the isch