医学毕业论文--IL6对NIH3T3细胞MMP3与TIMP1表达影响.docVIP

IL6对NIH3T3细胞MMP3和TIMP1表达影响 作者：苏萌 邹云雯 褚言琛 杨堃 【摘要】 目的 探讨白细胞介素6(IL6)对小鼠NIH3T3成纤维细胞中基质金属蛋白酶3(MMP3)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)表达的影响。方法 应用不同浓度(0、5、10、15、20 mg/L)的IL6刺激NIH3T3成纤维细胞，共同培育12 h收集细胞。应用Western blot和 RTPCR方法分别检测细胞内MMP3和TIMP1的表达。结果 MMP3表达随着IL6浓度的升高而上升，TIMP1表达随着IL6浓度的升高而下降。结论 IL6能影响MMP3和TIMP1的表达平衡，可能是影响硬膜外瘢痕形成的机制之一。 【关键词】 白细胞介素6;瘢痕;基质溶解素1;金属蛋白酶1组织抑制剂 [ABSTRACT] Objective To study the affect of IL6 on the expressions of MMP3 and TIMP1 in NIH3T3 fibroblasts in mice. Methods Different concentrations (0,5,10,15 and 20 mg/L) of IL6 were applied to stimulate NIH3T3 fibroblasts and culture for 12 h and collect the cells. Western bolt and RTPCR were employed to detect the expressions of MMP3 and TIMP1 within the cells. Results The expression of MMP3 increased with the rising concentration of IL6,and TIMP1 declined. Conclusion IL6 can affect the balance between the expressions of MMP3 and TIMP1, which is, probably, one of the mechanisms of epidural scar formation. 　　[KEY WORDS] interleukin6; cicatrix; stromelysin 1; tissue inhibitor of metalloproteinase1 　　大量研究表明，硬膜外瘢痕增生被认为是腰椎手术失败综合征(FBSS)的重要原因[1]。硬膜外瘢痕则是由于细胞外基质(ECM)的异常沉积所致。基质金属蛋白酶3(MMP3)能降解ECM，其活性受到金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)的抑制，两者在瘢痕形成中起着重要的作用[2]。本研究应用炎症因子白细胞介素6(IL6)刺激小鼠NIH3T3成纤维细胞，观察其中MMP3和TIMP1表达的改变，从而探讨IL6在瘢痕形成中的作用机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞 小鼠NIH3T3成纤维细胞(购于中国科学院上海细胞库)。 　　1.1.2 试剂 IL6(Sigma公司)，兔抗小鼠MMP3单抗(Bioworld公司)，兔抗小鼠TIMP1多抗(Bioworld公司)，辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔二抗(Santa Cruz Biotechnology 公司)，TRIZOL、RTPCR kit(TaKaRa公司)。 　　1.1.3 主要仪器 恒温培养箱(Thermo Forma，USA);倒置显微镜(Olympus,Japan); Western电泳仪;转膜仪(BioRad，USA);PCR扩增仪(Eppendorf,Germeny);VILBER LOURMAT紫外线凝胶成像系统(France)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 细胞在37 ℃、体积分数为0.05 CO2的培养箱中培养，实验用第5～8代细胞，将细胞按照1×108/L接种于6孔培养板中，待细胞贴壁融合达到80%～90%时，换无血清的DMEM培养液继续培养18 h，然后加入不同质量浓度(0、5、10、15、20 μg/L)的IL6刺激小鼠NIH3T3成纤维细胞12 h，收集细胞。 　　1.2.2 Western blot检测 细胞干预完毕后，加入细胞裂解液冰上裂解30 min，离心收集上清液，变性的蛋白样品经100 g/L分离胶电泳，恒流转膜至PVDF膜，封闭过夜，一抗分别用兔抗鼠MMP3单抗和兔抗小鼠TIMP1多抗，室温孵育60 min,二抗用HRP标记的羊抗兔抗