酶蛋白直接修嘧啶二聚体机理的模型研讨.pdfVIP

摘要 摘要 生物体DNA中嘧啶碱基在紫外光(200．300rim)作用下主要生成两种光化学 录，引起细胞变异甚至死亡，是诱发皮肤癌的主要原因。细胞可以通过切除修复 或光解酶参与下的光复活作用来修复这些损伤。因此，研究DNA光损伤和光复 活过程将有助于揭示生物体内酶促DNA光复活作用机理。 DNA光解酶是含有黄素的单体蛋白质，由454-614个氨基酸残基组成，其 作用机理大致如下：光解酶识别并特异性地结合底物后，天线辅酶(MTHF或 8-HDF)吸收IⅣMs(300．500rim)区光子而被激发并将能量传给催化辅酶 FADH-，激发态的FAD盯向底物分子转移一个电子使二聚体发生开环反应，底 物得以修复，这一过程称为DNA光复活。 为了更好地研究光复活过程的机理，人们设计了大量发色团一二聚体共价连 接的化合物，作为酶一底物复合物模型来模拟光解酶的作用。这些模型化合物有 助于我们详细地理解，在光驱动下光解酶通过电子转移反应来修复二聚体的作用 机理。但是在整个光复活过程中还有许多光物理一光化学方面的机理问题没有解 决，尤其是去辅基的E 光激发下可以通过电子转移反应来直接高效地修复底物嘧啶二聚体(由=0．56)。 主要从模型化合物的分子内电子转移来研究酶蛋白的直接高效修复机理，进 一步理解CPD光解酶的光化学一光物理过程。合成了色氨酸(Trp)或／和酪氨酸 (Tyr)与胸腺嘧啶二聚体共价连接的化合物作为模型物，用来模拟DNA光解酶的 修复反应。在不同pH值的缓冲溶液中，这些化合物中二聚体的光敏化裂解效率 受发色团(Trp或Tyr)氧化电位的影响很小，主要是因为电荷分离中间体 (Tr，．D．．或Ty，矿)内电荷重合太快，二聚体自由基阴离子(D．-)的开环速率 无法与其进行有效竞争。另外，由于在蛋白质或多肽中Trp和Tyr之间可以发生 电子转移反应，我们在色氨酸一二聚体模型中引入了酪氨酸，希望利用Tyr向 裂解量子产率没能增大。 摘要 由于化合物所处环境的性质对二聚体的裂解量子产率有较大影响，我们用不 同量路易斯酸碱(三乙胺或三氟化硼)来研究环境电子云密度对色氨酸一二聚体 模型化合物光敏化裂解性质的影响。发现在TI-IF中三乙胺或三氟化硼对二聚体 裂解量子产率的影响非常小，主要是因为在模型化合物的电荷分离中间体 (Trp+．D．-)内与二聚体裂解相竞争的逆向电子转移过程太快。 最后，用咕吨酮、对甲氧基苯乙酮或4，4’．二甲氧基二苯酮作为敏化剂来研究 三重态色氨酸敏化二聚体裂解的性质。发现将色氨酸一二聚体模型化合物和敏化 剂的甲醇溶液用光照射后，HPLC表明只在含对甲氧基苯乙酮的模型溶液中二聚 体发生了裂解反应。 关键词：DNA光解酶环丁烷嘧啶二聚体电子转移色氨酸酪氨酸模型研究 U ABSTRACT DNAis ultraviolet to damagedby sunlight component(200-300nm)of givemany two lesionsalethe potentiallymutagenic major photoproducts．The cyclobutane pyrimidinedimers(CPDs)and constitute 70-80％and20-30％ofthetotal lesions willblock and of to and replicationtranscriptionDNA,leadingcytotoxicmutagenic effects．In two