兰州大学研究生生物化学-酶学考试题.docVIP

兰州大学硕士生高级生化Ⅱ酶学部分考试题名词解释（每词4分共20分）1. 协同系数 即Hill系数。国际上常使用此系数来判断酶所属效应的类型。以log(v/(Vm-v))对log[S]作图，曲线的最大斜率h称为Hill系数，米氏酶等于1，正协同酶大于1，负协同酶小于1。 2. 共价催化 一个底物或底物的一部分与催化剂形成共价键，然后被转移给第二个底物。许多酶催化的基团转移反应都是通过共价催化方式进行的。 3. K型效应剂 影响米氏常数Km值的效应剂，它与V型抑制剂相对应。 4. 别构酶 当某些化合物与酶分子中的别构部位可逆地结合后，酶分子的构象发生改变，使酶活性部位对底物的结合与催化作用受到影响，从而调节酶促反应速度及代谢过程，这种效应称为别构效应。具有别构效应的酶称为别构酶。5. 记忆酶简答题(每题５分，共40分)：1. 发现酶活性受可逆抑制剂的抑制后，如何消除这种抑制作用? 如果这个抑制剂是小分子物质,可用酶制剂透析一下,或通过一个交联葡聚糖G50的分子筛J,也可通过超滤膜等方法来去除,但如抑制剂和酶一样,一也是大分子,则必需了解其性质,如为蛋白质可用各种层析法使其和被抑制的酶分开,如为核酸则可用相应的DNA酶或RNA酶将其分解。2. 在纯化酶时，为什么亲和层析纯化效率高? 这是由亲和层析的性质决定的。因为亲和层析柱的原理是将对生物分子专一识别性或特异相互作用的物质即亲和配基固定在不同的介质上，然后利用生物分子之间的专一性识别性或特定的相互作用而将生物分子如（酶）分离。如酶与底物的识别结合。而这种结合在一定的条件下又是可逆的。3. 当一个酶可以作用于多种底物时，如何判断哪一种底物是其天然底物? 可通过Km值判断。它表示酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度。在在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。4. 在抑制剂浓度一定时，有一类可逆抑制剂的抑制作用随着底物浓度的增加而增加，这是哪类可逆抑制剂?这是反竞争性抑制剂，此种抑制剂必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用。5. 固定细胞作为催化剂常用哪一种固定方法? 固定化细胞（微生物细胞、植物或动物细胞）的固定化方法，常用的是包埋法：将细包埋在多孔载体而制成固定化细胞的方法，常用的是凝胶包埋法（如聚丙烯酰胺、海藻酸钙凝胶、角叉菜胶等）。由于此法能较好的保持细胞内的多酶反应系统的活力，凝胶包埋法是应用最广泛的细胞固定化方法。6. 为什么测酶活性时常要求测反应的初速度? 因为在酶促反应时间去限制，随着时间的延长，斜率降低，反应速度也就降低，此时测得的酶活力不能代表真实的酶活力。引起酶促反应速率随时间延长而降低的原因很多，如底物浓度降低，产物浓度增加加速了逆反应进行，产物对酶的抑制等等。因此，测定酶活力，应该测定酶促反应的出速率，从而避免上述种种复杂因素对反应速率的影响。最后，酶量和反应初速率呈线性关系，所以可以用初速率来测定酶活力。7. 为什么有些酶活性抑制剂对酶活性的抑制是可逆的，有些是不可逆的? 因为生物体中，有些酶在基因的调控下会在不同的时间或空间产生活性，故需要可逆性酶抑制剂，在不需要此酶发生作用时抑制酶活性，在需要此酶产生作用是与酶可逆性分离。而有些酶则不需要。8. 在别构酶的动力学研究中，Hill系数有什么意义?Hill系数是了解释 HYPERLINK /biegoumei_108199/ \o 医学百科：别构酶 别构酶协同效应的机制的。以log(v/(Vm-v))对log[S]作图，曲线的最大斜率h称为Hill系数，米氏酶等于1，正协同酶大于1，负协同小于1。三、问答题(每题10分，共40分)：1. 用迅速平衡法和稳态法推导的米氏方程中的Km有什么异同? 迅速平衡法是假设酶酶底物复合物释放出酶的速度很慢（即K3很小），是反应的限速步骤。在底物浓度远大于酶浓度时且在反应初期，逆反应可忽略不计。 而则认为酶底物复合物释放出酶的反应不是限速步骤，即反应进行一段时间后系统的复合物浓度由零逐渐增加到一定数值，然后保持不变。两者的区别是迅速平衡法推导的米氏常数是Ks=K2/K1,稳态法推导的米氏常数是Km=(K2+K3)/K1。2. 在一个符合米氏方程的酶反应中，已知使酶反应速度达到最大反应速度的20%时的底物浓度为2mmol/L，若要使酶反应速度达到最大反应速度的80%，需要多大的底物浓度?3. 填写下表中的空格：纯化步骤体积(ml)酶浓度(u/ml)总酶活性(u)蛋白浓度(mg/ml)总蛋白(mg)比活性(u/mg蛋白)收率(%)纯化倍数粗酶液250410002050000.0