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水飞蓟宾脂质体制备处方研究 　　摘要：目的：对水飞蓟宾脂质体的制备处方进行研究。 　　方法：采用薄膜分散法制备水飞蓟宾脂质体，用紫外分光光度法测定其包封率，以药物用量、磷脂用量、胆固醇用量和磷酸盐缓冲液的pH为处方的考察因素，并采用L9（34）正交试验筛选最优处方。 　　结果：最佳制备处方是水飞蓟宾12mg，卵磷脂180mg，缓冲液pH为6.5，胆固醇37.5mg。 　　结论：药物用量、卵磷脂用量、缓冲液的pH及胆固醇用量对水飞蓟宾脂质体制备的影响依次减弱。 　　关键词：水飞蓟宾 脂质体 薄膜分散法 制备处方 　　Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.03.058 　　【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801（2014）03-0045-02 　　水飞蓟宾是临床上常用的肝损伤修复药物，用于治疗急慢性肝炎、肝硬化、脂肪肝、酒精肝及中毒性肝损伤。药理学研究表明，水飞蓟宾具有保肝解毒、降血脂、保护心肌细胞、抗血小板聚集、免疫调节等多种药理活性[1]。然而由于其难溶于水，脂溶性也差，口服吸收差，生物利用度很低[2]。本文采用紫外分光光度法进行水飞蓟宾脂质体的制备处方研究，以增加其溶解度，提高生物利用度。 　　1 仪器和试剂 　　UV757CRT型紫外可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；FA2004N型电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）；R系列旋转蒸发器（上海申生科技有限公司）；TGL-16GB型台式高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；KQ-400KDB型高功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；水飞蓟宾原料药（含量98%，上海晶纯实业有限公司）；水飞蓟宾标准品（含量≥98%，上海晶纯实业有限公司，批号：MG0020）；注射用大豆卵磷脂（上海晶纯实业有限公司）；胆固醇（上海晶纯实业有限公司）；其他试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 最大吸收波长的测定。精密称取水飞蓟宾标准品2.5mg，用15ml无水甲醇超声溶解，并定容至25ml，制成100μg/ml的水飞蓟宾标准品溶液。取空白脂质体溶液0.5ml于10ml的容量瓶中，加入无水甲醇，并用无水甲醇定容至刻度，即得空白脂质体破乳液。分别取上述溶液，以甲醇溶液为空白，按紫外分光光度法在250～330nm波长范围内进行紫外扫描。 　　经过上述测定，水飞蓟宾标准品溶液在287nm处有最大吸收，空白脂质体溶液在此波长处无最大吸收，即无干扰。因而选择287nm用于检测水飞蓟宾脂质体中水飞蓟宾含量的检测波长。 　　2.2 标准曲线的制备。精密称取水飞蓟宾标准品10mg，置100ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，摇匀，即得100μg/ml贮备液。分别精密量取储备液适量于10ml容量瓶中，加甲醇稀释定容，得浓度为5、10、15、20、25μg/ml的一系列标准溶液，以甲醇作为空白，于287nm分别测定吸光度，以吸光度（A）对水飞蓟宾浓度（C）进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程：A=0.0306C-0.0098（r=0.9999），结果表明水飞蓟宾在5～25μg/ml范围内线性关系良好。 　　2.3 精密度试验。分别取10、20、25μg/ml三种浓度的水飞蓟宾标准品溶液各5份，在上述的测定条件下测定吸光度，计算日内精密度；将标准品溶液放置于4℃冰箱内，并每天测定吸光度，连续测定5天，计算日间精密度。计算结果见表1。 　　结果表明，水飞蓟宾标准品溶液的精密度小于2%，符合方法学要求。 　　2.4 回收率试验。分别量取水飞蓟宾脂质体溶液0.5ml，分别置于9个带刻度的试管中，分别标号为1～9号。在1～3，4～6，7～9号试管中分别加入水飞蓟宾贮备液1ml、1.5ml、3.0ml加入无水甲醇到10ml刻度，即得10、20、25μg/ml三种浓度的水飞蓟宾供试液，测定吸光度。按标准曲线方程求得实际的药物浓度，则各实际浓度与相应理论浓度的比值即为回收率，计算回收率见表2。 　　按照上述方法测定回收率，结果表明回收率试验符合方法学要求。 　　2.5 水飞蓟宾脂质体的制备方法。采用薄膜分散法制备水飞蓟宾脂质体。精密称取水飞蓟宾10mg、豆磷脂100mg、胆固醇50mg于500ml茄形瓶中，加入10ml有机溶剂充分溶解。于35℃水浴减压蒸馏除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，室温真空干燥过夜除去残余溶剂。加入20ml0.01M磷酸盐缓冲溶液洗膜，于35℃恒温水浴水化2h，水浴超声30min，得到乳状半透明脂质体溶液，密封置于冰箱4℃保存。 　　2.6 脂质体包封率的测定。取水飞蓟宾脂质体0.5ml置于10ml容量瓶中，加入无水甲醇至刻度，进行破乳。经孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤后取续滤液测定吸光度，并根据标准曲线计