第七章 微生物生长与环境.docVIP

第三章 微生物的生长和生活环境 在上一章，对于微生物的代谢活动，我们已经有了初步的了解。那么，微生物通过代谢活动，其最终结果是什么呢? 很显然，代谢活动的结果必然导致微生物的生长和繁殖。在高等生物中，生长与繁殖是两个可以分开的过程，而在微生物中，生长和繁殖是相互紧密相连而无法区分的，加上微生物在生长过程中，其体积和重量的变化不易觉察，所以，在讨论微生物的生长时，我们常常用细胞数量的增加或者是细胞群体总重量的增加作为指标来衡量。即人们较多地在微生物群体水平上来研究微生物的生长。第一节 纯培养在研究某种微生物的生长规律的时候，我们第一步需要进行的工作就是获得该种微生物的纯培养。那么在这里，我们必须首先清楚，什么是纯培养。一、培养的概念所谓纯培养，是指在实验室条件下，从一个微生物细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。二、纯培养的技术纯培养的技术包括两个基本步骤：(1)从天然环境中分离纯培养对象；(2)在以纯培养对象为唯一生物种类在隔离环境中培养繁殖。纯培养最常用的方法有稀释平皿法，划线法，单细胞挑取法。1、稀释平皿法：根据操作的方式分为倾注平皿法和涂布平皿法。整个过程分为三步：第一步：准备工作（采样、无菌水，培养基等……）第二步：梯度稀释过程，具体……第三步：分离培养过程，具体……在上述整个过程中，归纳起来要注意几个问题：(1)梯度稀释的稀释度的确定：依据需分离微生物在土壤中的数量而定。目的：使最终稀释液中菌体浓度比较适中，能形成各自独立的菌落以便分离，一般30~300个菌落/皿。(2)选择菌落接种的依据a、菌落具有所需分离微生物的菌落特征；b、菌体镜检具所需分离微生物的一般特征。(3)使用该法获得微生物纯培养的标准多次分离后接种的菌落特征一致，无杂菌菌落。（4）整个操作过程要保持无菌操作，避免环境杂菌污染。2、单细胞挑取法：这种方法是从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。具体方法：把待分离材料放在显微镜载物台上，并找到所需的细胞。然后用安装在显微镜上的挑取器上极细的毛细吸管，对准所需细胞挑取出来，并接种于培养基上培养。一般用来挑取一些真菌、放线菌孢子，这种方法过程非常简单，但在操作技能上，要求较高。3、划线法(平皿划线法) 用接种法，沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使待分离材料中的微生物能尽可能分开，并在培养基表面形成一个独立的菌落。并从独立的菌落中获得所需个体的纯培养。三、纯培养的保存技术在实验室中，纯培养一般保存于试管斜面培养基上，具体的方法是将纯培养的微生物接种到试管斜面培养基上，让其在适宜温度下繁殖生长一定时间，然后，再把它放置于低温、干燥或隔绝空气的环境下保存(目的，使之代谢活性降低到最低水平，使之基本上处于休眠状态)纯培养的保存操作过程中，特别要注意的是防止杂菌污染，一旦试管斜面上除了接上纯培养的微生物还有其它杂菌时，纯培养就会变成混合培养了，因而就失去保存的价值。具体地说，在纯培养保存操作过程中，要求注意三方面的问题：1、培养基及试管 、棉塞等灭菌要彻底；2、塞子大小要合适；3、进行无菌操作。整个过程要在无菌条件下进行，接种工具要进行严格的灭菌。第二节 纯培养群体生长规律由于微生物生长和繁殖的特殊关系，以及生长过程中其个体体积和重量变化的微小性，所以在讨论微生物生长时，我们常常以细胞数量的增加或细胞群体总重量的增加作为指数来衡量。那么，在讨论纯培养群体生长规律的时候，我们首先必须弄清楚，如何来测定微生物的生长量?一、微生物生长量的测定：微生物生长量的测定，主要从重量和数量的两方面着手。(一)微生物数量的测定：1、显微镜直接计数法使用细菌计数板或血球计数板在显微镜下直接计数。具体原理是这样的：细菌计数板或血球计数板上的很多个小方格，每个小方格体积一定，将一定稀释度菌液滴于计数板上，使之均匀分布充满于各小方格中，然后在显微镜下直接计数小方格中的菌数。由于小方格的体积是一定的，因此就可以算出稀释液中菌的浓度。2、稀释平板计数法：(详细介绍，讲清楚)这一方法相对于镜检直接计数法来说要复杂得多，其过程与稀释平皿法纯培养的分离步骤相似：取定量的一定稀释度的菌液均匀涂布于灭菌处理的培养皿培养基上，在一定温度下培养，使每个菌体形成可见的独立的菌落，根据菌落数来确定稀释液中的菌体数。以上我们介绍了两种微生物计数方法，这两种方法是实验中常用的测定方法。比较这两种方法，同学们不难看出它们各自的优缺点：显微镜直接计数法测定的是菌体的总数，死活菌各为多少无法分清，稀释平板法因为计数的是菌落数，所以它测定的只是待测菌液中的活菌数，对于死菌数则无法测定。 (二)微生物重量的测定对于放线菌、霉菌来说，由于它们是丝状菌体，其生长往往表现在菌体的延长上，而不象细菌那样是