第二章纯培养与显微技术.docVIP

第一节：微生物的分离和纯培养·从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步·培养物：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体·混合培养物：含有多种微生物的培养物；·纯培养物：只有一种微生物的培养物；·通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果·不同微生物的味道：（1）酵母菌：酒香味（2）细菌：臭味（3）放线菌：苦味（4）霉菌：霉味一、无菌技术·概念：用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物，在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染，其自身也不污染环境。 ·常用的器具：试管、瓶子、培养皿等（培养皿装有培养基后称为培养平板即“平板”）·常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌（水蒸气121℃高温干热灭菌（空气160-190℃·明胶液化：（1）温度高于30℃·无菌操作：火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行 液体培养基·培养基： 固体培养基（1％-2％琼脂） 半固体培养基（0.2％-0.7％琼脂）·菌落（colony）：单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 ·众多菌落连成一片：菌苔（lawn）·不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（如形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据斜面培养基上细菌菌苔特征 液体培养基中细菌生长特征 ·使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：稀释！二、用固体培养基分离纯培养1、稀释倒平板法：操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！2、涂布平板法：使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！3、平板划线法4、厌氧微生物的分离：厌氧罐、厌氧手套箱、稀释摇管法、穿刺培养三、用液体培养基分离纯培养·稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。例如：若同一稀释度的试管中有95%表现为不生长，则生长的试管中仅含一个细胞的几率为：4.8%； 含二个细胞的几率为：0.12%； 含三个细胞的几率为：0.002%0.048/0.048 + 0.0012 + 0.0002=0.975在有细菌生长的试管中得到纯培养的几率为97.5%四、单细胞（孢子）分离·概念：通过机械、空气或油压传动装置来减小手的动作幅度，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。·一般采用显微操作仪，在显微镜下进行。·操作难度与细胞或个体的大小成反比。·微生物在自然条件下存在的特点：（1）同一生态环境中混杂存在着不同种类的细菌； （2）不同细菌在数量存在差异；五、选择培养分离·没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切微生物生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。·微生物群落中数量占少数的微生物的分离纯化：（1）抑制大多数其它微生物的生长（2）使待分离的微生物生长更快——使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。（3）使待分离的微生物生长“突出”；——直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。1. 利用选择培养法进行直接分离——待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制·高温下培养：分离嗜热细菌；·培养基中不含N：分离固氮菌；·培养基加抗生素：分离抗性菌；·牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；2. 富集培养特定的环境条件→仅适应于该条件的微生物旺盛生长→待分离微生物在群落中的数量大大增加→从自然界中分离到所需的特定微生物·富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微生物的需要。·根据微生物的特殊要求，从自然界分离出特定已知微生物种类；·分离培养在特定环境中能生长的微生物；第二节：显微镜和显微技术几个基本概念：·放大：被观察物越小，放大倍数应越大，否则难以看清！·分辨率：特定条件下能辨析的两点之间的最小距离·反差：被观察物区别于背景的程度·显微技术：与显微镜的自身特点有关，但也取决于进行显微观察时对显微镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术。 一、显微镜的种类及原理1. 普通光学显微镜·目镜：10 ~ 15 ×；物镜： 100 ×；则总放大倍数1000~1500 ×；·使用油镜，即在100×物镜和载玻片之间滴加香柏油； 0.5 λ ·分辨率（最小可分辨距离）= ———— n sin θ ·θ为物镜镜口角的半数，它取决于物镜的直径和工作距离·N：玻片与物镜间介质的折射率·用浸没油取