细胞通讯2012课件.ppt

研究表明，受cAMP调控的转录单位的转录调控区都有一个共同的碱基序列：TGACGTCA，称为cAMP反应元件（cAMP reaction element,CRE) 　能与CRE结合的转录因子称为CRE结合蛋白（CRE binding protein，CREB）； 　 　CREB以二聚体的形式结合在特异DNA序列上，但无转录激活作用，CREB的磷酸化是其活化的必要条件。 （2）对基因表达的调节作用 磷酸化核内的转录因子调控基因表达 PKA的催化亚基进入细胞核后使CERB特定Ser（133位丝氨酸）磷酸化修饰，结果改变了CREB转录活化域的构象，活性可增强10-20倍，从而激活基因的转录。 Gs AC ATP cAMP C C R R C C 蛋 白 磷 酸 化 R R 2cAMP 2cAMP CREB N Pi Pi Pi 转录活化域 DNA结合域 细胞膜 核 膜 Ｃ Ｃ 结构基因 Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ 细胞核 Pi Pi Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ Pi Ｃ Ｒ Ｅ Ｂ Pi ＣＲＥ DNA 蛋白质 N C DBD 配体 Gs AC ATP cAMP PKA P 121，133， 156 CREB 转录活化域 受体 腺 苷 酸 环 化 酶 系 统 的 作 用 机 制 激素 受体 + G-GTP G-GDP 腺苷酸环化酶 无活性 有活性 ATP cAMP 蛋白激酶 无活性 有活性 酶或蛋白 的磷酸化 调节代谢 调节基因表达 （二）Ca2+信使系统 是继 cAMP 提出后动物细胞发现的另一个胞内信使； 长期以来，对Ca2+作为信使作用的确切机制并不十分清楚，60年代末美籍华人张槐耀博士在动物细胞发现了钙调蛋白（Calmodulin,CaM)这一Ca2+的多功能受体蛋白后，才对Ca2+作为第二信使的作用机制有了深刻认识。 细胞内外Ca++分布及形式： 通常细胞总钙以游离钙（Ca2+）和结合钙两种形式存在，游离钙的分布与转移是形成Ca++信号的基础。 胞内外Ca2+分布不均； 胞外Ca2+ （5mmol/L）》胞内Ca2+ （0.1-10μmol/L) 胞内Ca2+分布也不均匀： 内质网 线粒体 胞内Ca++库（占90%） 正是由于Ca2+在细胞内外及不同的亚细胞部位存在Ca2+浓度的差异或跨膜浓度梯度，就给细胞游离Ca2+浓度升高提供机会。 导致胞液游离Ca2+浓度升高的反应有两种： 一是细胞质膜钙通道开放，引起胞外钙跨膜内流； 二是细胞内钙库膜上的钙通道开放，引起胞内钙库释放。 CaM的发现及对科学工作者的启示： 1964年，美籍华人张槐耀在宾州大学探讨细胞内cAMP浓度的变化及影响因素； ATP cAMP 5’-AMP 腺苷+Pi AC PDE 5’-AMP酶 提纯并鉴定牛脑PDE 困惑 纯酶比粗酶活低？？？？ PDE活性测定的两步法与一步法比较： 原理： cAMP 5’AMP 　腺苷+Pi PDE 5‘AMP 酶　 蛇毒 两步法：先将cAMP与PDE保温，终止反应后在加蛇毒； 一步法： 将cAMP、PDE及蛇毒同时保温。 结果：对于非提纯的PDE，两种方法测定的活力一样； 　对于提纯的PDE，一步法比两步法测出的活力高的多； 对此，张作了假设：即粗提液中可能存在PDE的活化因子，在提纯时丢掉了，而蛇毒不仅提供了5‘-AMP酶，还补偿了这种活化因子。 最后终于找到了具有蛋白质性质的PDE活化因子，并与60年代末进行了提纯，于1978年张氏将其称为Calcium-modulated protein,Calmodulin,CaM CaM的性质与分布： 　　148个氨基酸组成的单链蛋白； 　　每个CaM分子可结合4个Ca++ ； 　　分布广泛，进化上保守； Ca++在信号传递中的作用： 在已知的第二信使中， Ca++作用最为复杂。 它即可独立完成信息传递， 还可协调其它第二信使的信息传递作用。 Ca2+信使分子的可能作用途径： 　　 Ca2+.CaM 依赖性蛋白激酶途径：即通过CaM起作用，在Ca++信号传递中起主要作用 　　CaM是细胞内Ca++的受体。CaM本身无活性，只有与Ca++结合形成Ca.CaM复合物才能发挥调节作用。