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- 2018-07-08 发布于天津
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一、核酸的分离、提纯和定量测定.ppt
一、核酸的分离、提纯和定量测定 真核生物染色体DNA的分离: 1、利用DNP的溶解性分离DNP: DNP溶于水和浓盐溶液(如1mol/L NaCI),但不溶于生理盐溶液(0.14mol/L NaCI) 2、DNP再以苯酚抽提,除去蛋白质(反复几次)(也可用氯仿-异戊醇) 3、在有一定盐存在下,加二倍体积的冷乙醇,沉淀DNA,用乙醚或乙醇洗涤后干燥。 真核细胞DNA的分离(方案二) 细胞悬浮液 (二)RNA的分离 比DNA更不稳定,RNase到处存在 通常制备RNA要注意3点: (1)所有玻璃器皿都有经高温焙烤,塑料用品经高压灭菌,不能高压灭菌的要用0.1%的焦碳酸二乙酯处理。 (2)细胞破碎时加入强变性剂(如盐酸胍) (3)加入RNase抑制剂(Rnasin) (三)核酸含量的测定 定磷法:定磷试剂 兰色物质,660nm 细胞或组织中核酸组分的分离和含量的测定 二、核酸的超速离心 1、核酸密度的测定 氯化铯密度梯度离心 ρ=ρ0 + 4.2ω2(r2-r02) × 10-10 ρ0标准DNA的密度 2、DNA中G-C含量的测定 ρ=0.100xG-C + 1.658, ρ为DNA浮力密度 3、用于核构象的研究 4、用于核酸的制备 三、核酸的凝胶电泳 1、琼脂糖凝胶电泳 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳 四
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