丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障保护作用.docVIP

丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障保护作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.10.012 　　基金项目：国家自然科学基金30971626） 　　【摘要】目的 探讨丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的保护作用。方法 健康清洁级雄性SD大鼠，40只随机（随机数字法）分为4组：假手术组（Ⅰ组）、失血性休克模型组（Ⅱ组），复方氯化钠静脉复苏+PD-2液腹腔复苏组（Ⅲ组），复方氯化钠静脉复苏+丙酮酸钠腹腔复苏组（Ⅳ组），每组10只。采用Wiggers改良法制备失血性休克模型。Ⅱ组行右颈总动脉、右股静脉、左股动脉插管及全身肝素化。Ⅲ组、Ⅳ组行静脉复苏的同时，分别向腹腔内注入2.5% PD-2液20 mL和2.5%丙酮酸钠液20 mL。2 h后取动脉血测血气（pH、PaCO2、PaO2）和D-乳酸含量，光镜下观察各组大鼠小肠黏膜组织形态变化。结果 血气分析：Ⅲ组、Ⅳ组较Ⅱ组pH水平及PaO2含量明显升高（P 　　【Key words】Hemorrhagic shock； Mucosa abdominal； Intraperitoneal resuscitation； Pyruvate； D-lactic acid 　　失血性休克（hemorrhagic shock，HS）是临床常见的急危重症之一，全身有效循环血量锐减、组织灌注不足是其主要病理生理改变。目前，经静脉补液是HS复苏的主要方法，但肠道血流并未被及时恢复，肠黏膜屏障功能仍处于破坏状态，导致炎性介质大量释放，加重多器官微循环障碍；而且不能通过大量静脉液体复苏所逆转[1-2]。腹腔复苏（intraperitoneal resuscitation，IR）是美国Zakaria等 [3-5]提出的一种治疗HS的新型方法。路小光等[6]在大鼠实验研究发现较单纯静脉复苏，静脉复苏加2.5%腹膜透析液（Delflex液，PD-2）IR可显著降低实验动物血浆二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）含量、血浆D-乳酸（D-lactic acid，D-LA）及内毒素含量，证明PD-2液IR可以降低肠黏膜通透性、减轻内毒素血症的发生，在维持肠黏膜完整性方面具有显著优势；但PD-2液以乳酸钠为主要成分，酸中毒调节能力及全身碱化作用较弱，可能不利于休克患者的病情恢复。 　　丙酮酸是糖酵解的关键中间产物，是糖类、蛋白质和脂类的代谢枢纽。Zhou [6]研究表明丙酮酸钠液具有改善休克细胞的糖代谢、增强机体全身碱化和抗氧化的特性。将丙酮酸钠应用于腹腔复苏，能否更好的恢复肠道血运，纠正酸中毒，保护肠黏膜屏障功能，降低HS病死率？ 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　健康清洁级雄性SD大鼠40只，6～8周龄，体质量250～300 g，大连医科大学动物实验中心提供，适应性喂养1周，实验前禁食12 h，禁水4 h。随机（随机数字法）分为4组：假手术组（Ⅰ组）、HS模型组（Ⅱ组），复方氯化钠静脉复苏+PD-2液腹腔复苏组（Ⅲ组），复方氯化钠静脉复苏+丙酮酸钠腹腔复苏组（Ⅳ组），每组10只。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 主要试剂 　　2.5%的PD-2腹膜透析液：购自广州百特医疗用品有限公司。2.5%丙酮酸钠液：丙酮酸钠（Sigma公司）4.48 g、氯化钙0.183 g、氯化镁0.05 g、氯化钠5.38 g溶于750 mL重蒸水中，最后加入10%葡萄糖液250 mL。用稀HCl下调pH值为4.5，过滤消毒后分装（大连大学附属中山医院药剂科），4℃保存。使用前恒温水浴锅加热至37℃，配置后测定渗透压为395 mOsmol/L。D-LA乳酸试剂盒购自美国sigma公司。戊巴比妥钠购自国药集团化学试剂有限公司。 　　1.2.2 动物模型制备 采用Wiggers改良法[7-9]制备HS大鼠模型。 　　腹腔注射3% 的戊巴比妥钠进行腹腔麻醉（40 mg/kg）。麻醉后将大鼠固定在手术台，依次行右颈总动脉、右股静脉、左股动脉插管及全身肝素化（800 U/kg）。右颈总动脉接16道多功能生理记录仪，监测平均动脉压。经左股动脉放血造模：放血速度约为1～1.2 mL/min，使MAP降至35～40 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），此时暂停放血，随血压代偿回升。再分次间歇放血，直至MAP稳定在40 mm Hg，维持1 h即成功建立大鼠HS模型。Ⅲ、Ⅳ组在造模后经右股静脉回输放出的血量及2倍量林格氏液行静脉复苏，同时Ⅲ组Ⅳ组分别向腹腔注射2.5%丙酮酸钠液20 mL和2.5% PD-2液20 mL。液体复苏速度为1～1.2 mL/（min?kg）。 　　1.2.3 检测指标和方法 　　动脉血pH、P