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酸碱法水解缫丝废水中蛋白质工艺条件研究 　　摘要：以缫丝废水为试材，利用盐酸、氢氧化钠、磷酸水解丝胶蛋白质，优化缫丝废水中丝胶蛋白水解的最佳工艺条件，制备蚕茧氨基酸原料。正交试验结果表明，3种水解方法中利用盐酸的水解效果最好，最佳工艺条件为溶液中盐酸浓度6 mol/L，水解温度130 ℃，水解时间8 h。 　　关键词：缫丝废水；水解；工艺条件；氨基酸 　　中图分类号：X703 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）05-1145-03 　　在“东桑西移”工程的推动下，广西缫丝业迅速发展，缫丝废水也快速增加，缫丝企业带来的环境污染问题也日益凸显。缫丝厂排放的废水中所含的溶解性污染物有丝胶蛋白质、蜡质、脂肪、无机盐等，以丝胶蛋白质为主，其化学需氧量（COD）的贡献率在70%以上。丝胶蛋白质是一种宝贵的资源，有多种用途[1]。目前，缫丝厂制丝生产过程中溶解下来的丝胶蛋白随生产废水的排放而流失，并成为缫丝生产废水中的主要污染物，会对水环境造成不良影响。如果能够有效利用缫丝废水氮、磷、丝胶蛋白含量高的特点，应用于养鱼业，既可以达到净化污水的目的，又可以获得一定的经济利益，使缫丝企业与农业生产形成互利互惠的共生关系，从而提高资源的利用率，是废水资源化利用的一条良好途径，具有广阔的发展空间[2]。 　　丝胶蛋白分子量大，很难被鱼塘中的藻类和微生物消化吸收，丝胶蛋白进入机体内必须经过胃肠等消化器官分泌的消化液分解成游离的氨基酸才能被肌体吸收利用。现代医学发现，小分子多肽蛋白进入人或动物肌体后，不经过消化，可直接被肠道吸收[3]。丝胶蛋白多肽的制备方法有酸水解法、碱水解法及生物酶法。本研究以缫丝废水为原料，利用盐酸水解、氢氧化钠水解、磷酸水解的方法，确定缫丝废水中丝胶蛋白水解的最佳工艺条件，制备蚕茧氨基酸原料，为后续研究新型缫丝废水作为鱼塘肥水剂提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料和试剂 　　从广西柳城县鸿艺丝绸有限公司副产品加工车间取缫丝废水，并将取回的缫丝废水样品置于 　　4 ℃冰箱中低温保存备用。氢氧化钠、硼酸、甲醛、无水乙醇、磷酸、邻苯二甲酸氢钾、氯化钙、硫酸、浓盐酸、硝酸钾、无水氯化钙、硫酸钾、硫酸铜、三氯乙酸、无水碳酸钠均为分析纯；牛血清蛋白、考马斯亮蓝为生化试剂。所用水为二次蒸馏水。 　　1.2 主要仪器、设备 　　XYJ80-1型离心沉淀器、AL104型电子分析天平、DF-101S型集热式恒温加热搅拌器、SHZ-CD型循环水式多用真空泵、UV-1100型紫外可见分光光度计、KDN-08型消化炉、ZFD-5140型全自动新型鼓风干燥箱、LXJ-Ⅱ型离心沉淀机、微量定氮蒸馏装置。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 缫丝废水pH及密度的测定 缫丝废水pH的测定采用广泛试纸，密度的测定是将样品用容量瓶定容至50 mL，然后用精密电子天平称质量。 　　1.3.2 缫丝废水蛋白质含量 按GB 5009.5―2010食品安全国家标准食品中蛋白质的测定方法，用凯氏定氮法测定缫丝废水中总氮和非蛋白质氮的含量。 　　1.3.3 缫丝废水可溶性蛋白质含量 采用考马斯亮蓝染色法测定缫丝废水中可溶性蛋白质含量[4]。标准曲线的制作：取6支试管，编号后依次加入 　　0.1 mg/mL标准牛血清蛋白溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0.0 mL， 　　0.1 mg/mL考马斯亮蓝G-250溶液各5 mL。在 　　波长595 nm下测定吸光度，以吸光度值对相应浓度作图，得到标准曲线。 　　取适量样品，加入5 mL 0.1 mg/mL考马斯亮蓝G-250试剂并摇匀，放置5 min后。在波长595 nm 下测定缫丝废水中可溶性蛋白质的含量。 　　1.3.4 水解度的测定 用甲醛滴定法测定水解液中氨基氮含量[5]，水解度以水解液中氨基氮含量与缫丝废水中总氮的百分比表示。 　　1.3.5 正交试验优化方案[6，7] 取适量缫丝废水按照表1至表3加入盐酸、氢氧化钠和磷酸至所需浓度后，用蒸馏水定容（酸法定容至100 mL，碱法定容至150 mL），然后放入不同温度的集热式恒温加热搅拌器中反应，达到所需的时间后取出，冷却，离心过滤，调节pH至中性，最后采用甲醛滴定法测其氨基氮含量，计算水解度，选出最佳的工艺条件。 　　2 结果与分析 　　2.1 缫丝废水的pH及密度 　　缫丝废水呈淡茶色， 经测定pH为13，碱性较强，密度为1.005 2 mg/mL，接近水。 　　2.2 缫丝废水总氮及总蛋白质含量 　　采用凯氏定氮法测定缫丝废水中总氮及总蛋白质含量，得到其总氮为1.504 mg/mL，非蛋白质氮为0.390 mg/mL ，蛋白质氮1.114 mg/mL，总蛋白质含