原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8表达分析.docVIP

原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8表达分析 　　[摘要] 目的 分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达。 方法 选取该院2012年10月―2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇设为观察组，所有产妇均为剖宫产，另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇20例为对照组。对两组产妇的胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达进行分析对比。结果 观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.77±0.14）、（0.85±0.16）、（0.57±0.09），对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.40±0.06）、（0.35±0.10）、（0.46±0.08），两组数据结果比较差异有统计学意义（P0.05）。结论 通道蛋白8在产妇羊水量的调节中发挥重要作用。 　　[关键词] 原发性羊水过多；产妇；胎膜；胎盘；水通道蛋白8；表达 　　[中图分类号] R714.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）05（a）-0189-02 　　正常情况下，羊水的产生和吸收保持动态平衡，为胎儿运动、生长和发育提供必需的内环境。而这种动态平衡往往会因为各种因素打破，从而引起羊水量发生异常，大大提高了围产儿发病率和死亡率。临床表明，水通道蛋白8在母胎液和羊水平衡的调节中发挥了重要的作用[1-4]。为进一步分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达，该研究选取该院2012年10月―2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行对比分析，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选取该院收治的20名原发性羊水过多产妇设为观察组，所有产妇均为剖宫产，另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇设为对照组。所有产妇经产前检查显示各项体征正常，无胎儿畸形、胎膜早破、糖尿病及其他妊娠并发症。观察组中最大年龄为37岁，最小年龄为18岁，平均年龄（25.36±5.63）岁，最长孕周为42周，最短为37周，初产妇12例，经产妇8例；对照组中最大年龄为36岁，最小年龄为19岁，平均年龄（24.57±5.47）岁，最长孕周为42周，最短为37周，初产妇11例，经产妇9例。 　　1.2 方法 　　在产妇分娩之后立即取胎膜和胎盘组织标本各2份，采用无菌生理盐水将所取标本漂洗干净，同时将血液尽可能的去除干净。将其中一份标本分离出羊膜、绒毛膜和胎盘组织后置于液氮，另外一份则放置于浓度为4%的多聚甲醛中固定24 h后行石蜡包埋。水通道蛋白8 mRNA表达水平检测采用RT―PCR技术。具体检测步骤为：将预先准备的胎盘及胎膜组织取适量放置于液氮中研磨成粉末，采用由美国Invitrogen公司生产的TRlzol试剂提取总RNA。采用由日本TaKaRa公司生产的RNA PCR试剂盒按照操作规范提取总RNA并逆转录为cDNA，同时进行PCR扩增。PCR反应体系50ul，反应条件为：94℃预变性3 min一个循环；再94℃变性35 s，57℃退火40 s，72℃延伸45 s，共30个循环；最后72℃延伸6 min。PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统上成像并保存结果。采用Quantity One图像分析系统值分析电泳结果，同时对AQP8产物与B―actin产物的A值的比值进行计算，将计算值作为水通道蛋白8 mRNA的相对表达水平。 　　水通道蛋白8蛋白表达水平检测采用免疫组化技术。具体步骤为：预先将准备的标本通过浓度为4%的多聚甲醛固定一整天后实施石蜡包埋，切成5 μm的薄片备用。将石蜡切片进行脱蜡和水化处理，然后放进0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液（pH值6.0）中微波修复10～15 min；采用浓度为3%的H2O2去离子水处理10 min，将内源性过氧化物酶活性消除感觉，再按照标准操作规范进行封闭、稀释及显色，最后采用北航CM-2000B型生物医学图像分析系统对免疫组化图片进行分析。在×400的高倍视野下，每张切片随机选取5个视野，测量阳性表达部位的平均A值，以其均值表示AQP8蛋白的相对表达水平。 　　1.3 统计方法 　　将该次统计调查的实验数据均录入SPSS17.0软件包进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，进行t检验。 　　2 结果 　　观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.77±0.14）、（0.85±0.16）、（0.57±0.09），对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为（0.40±0.06）、（0.35±0.10）、（0.46±0.08），两组数据结果比较